HBOP誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞表型改變?cè)谀X出血后的保護(hù)作用初步研究.pdf

1、腦出血對(duì)于神經(jīng)外科來(lái)說(shuō)，高血壓、創(chuàng)傷后遲發(fā)性腦出血、腦血管疾病都是腦出血的高危因素;顱內(nèi)手術(shù)也必然伴有或多或少的腦出血。腦出血形成的腦血腫和繼發(fā)性腦水腫等，是導(dǎo)致腦出血后腦組織壓迫損傷、缺血缺氧、細(xì)胞毒性作用等腦組織損傷的決定性因素。腦水腫可能導(dǎo)致腦電活動(dòng)、腦血流量和腦組織代謝的改變，控制腦水腫可減輕腦出血后的神經(jīng)功能缺陷。小膠質(zhì)細(xì)胞作為腦組織內(nèi)定居的單核巨噬細(xì)胞系的初級(jí)免疫細(xì)胞，主要是在腦部炎癥中扮演發(fā)起和參加炎癥反應(yīng)和神經(jīng)修復(fù)的角色

2、，M1型小膠質(zhì)細(xì)胞能夠通過(guò)釋放炎癥前反應(yīng)介質(zhì)，參與了腦出血后腦組織繼發(fā)性損傷的過(guò)程，從而導(dǎo)致神經(jīng)功能缺陷和神經(jīng)細(xì)胞死亡。而M2型小膠質(zhì)細(xì)胞又能夠通過(guò)下調(diào)炎癥因子產(chǎn)生延遲細(xì)胞損傷的效應(yīng)或者通過(guò)清除神經(jīng)壞死組織并積極參與神經(jīng)再生。
　　高壓氧治療可以減輕水腫和改善腦部局部缺血缺氧，提高組織內(nèi)的氧分壓和氧含量，增加損傷組織的氧供給，可以減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，減少腦出血/缺血對(duì)腦組織的繼發(fā)性損傷，有利于受傷部位的神經(jīng)重塑和神經(jīng)功能修

3、復(fù)。據(jù)此，我們提出了高壓氧預(yù)適應(yīng)治療可以通過(guò)誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞表型變化在腦出血后產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用的假設(shè)，本研究分三部分:第一部分構(gòu)建實(shí)驗(yàn)大鼠的高壓氧預(yù)適應(yīng)模型和大鼠自體血注入腦出血模型。第二部分研究高氧預(yù)適應(yīng)對(duì)神經(jīng)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)保護(hù)的影響。第三部分探究高壓氧預(yù)適應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　一、高壓氧預(yù)適應(yīng)在腦出血后早期作用及其研究
　　目的:明確高壓氧預(yù)適應(yīng)在腦出血早期的作用，探討高壓氧預(yù)適應(yīng)在炎癥反應(yīng)和神經(jīng)功能恢復(fù)之中發(fā)揮作

4、用的機(jī)制。
　　方法:1.建立SD大鼠自體血注入腦出血模型和高壓氧預(yù)適應(yīng)治療的模型。
　　2.將實(shí)驗(yàn)SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦出血組和高壓氧預(yù)適應(yīng)組3組，每組27只實(shí)驗(yàn)大鼠
　　3.SD大鼠自體血注入腦出血模型構(gòu)建完成后，進(jìn)行頭部磁共振掃描檢測(cè)模型穩(wěn)定性
　　4.進(jìn)行術(shù)后的行為學(xué)評(píng)分，評(píng)價(jià)高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)神經(jīng)功能恢復(fù)的影響
　　5.通過(guò)干濕重法測(cè)定腦水含量，了解高壓氧預(yù)適應(yīng)治療后腦組織炎癥反應(yīng)的程度變化

5、r>　　6.使用Fluoro-Jade C染色對(duì)不同組間神經(jīng)退行性變的程度進(jìn)行檢測(cè)，觀察高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)神經(jīng)衰亡的影響
　　7.應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記法和免疫印跡分析檢測(cè)炎癥因子TNF-α的表達(dá)，探究高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)炎癥反應(yīng)的影響
　　結(jié)果:1.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療在腦出血后72h表現(xiàn)出明顯的行為學(xué)的改善，但在12h、24h并未展現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)。
　　2.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療在12h、24h、72h這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)都有明顯的腦水含量減少

6、>　　3.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療后腦組織內(nèi)的神經(jīng)退行性變程度明顯減輕，衰亡的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
　　4.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療后腦組織內(nèi)的炎癥因子TNF-α表達(dá)相對(duì)于腦出血組表現(xiàn)出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。
　　結(jié)論:高壓氧預(yù)適應(yīng)可在腦出血早期明顯的改善運(yùn)動(dòng)功能，并能夠有效減少大鼠腦出血后早期的腦組織水含量，腦出血后早期的炎癥反應(yīng)在經(jīng)高壓氧預(yù)適應(yīng)處理后被明顯減輕。同時(shí)，腦出血后的神經(jīng)退行性變減少，說(shuō)明了高壓氧預(yù)適應(yīng)治療可在腦出血后發(fā)揮神

7、經(jīng)保護(hù)中作用。通過(guò)對(duì)炎癥因子TNF-α進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)高壓氧預(yù)適應(yīng)能夠有效減少腦出血后的關(guān)鍵炎癥因子TNF-α的表達(dá)，而TNF-α與M1型小膠質(zhì)細(xì)胞呈正相關(guān)，說(shuō)明高壓氧預(yù)適應(yīng)可能誘導(dǎo)了小膠質(zhì)細(xì)胞在腦出血后的表型改變。
　　二、高壓氧預(yù)適應(yīng)治療在腦出血中對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞表型的影響
　　目的:研究高壓氧預(yù)適應(yīng)在腦出血炎癥急性期中對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的影響，并探究小膠細(xì)胞M1型和M2型在此過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化。
　　方法:1.通過(guò)免疫熒光

8、標(biāo)記和免疫印跡分析檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba-1的表達(dá)，觀察高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)量的影響。
　　2.通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)和免疫印跡分析檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba-1與M1型小膠細(xì)胞標(biāo)志物CD11b的比例變化，探究小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2表型在此過(guò)程中的動(dòng)態(tài)改變。
　　結(jié)果:1.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療后在12h、24h、72h這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均發(fā)現(xiàn)有相對(duì)于腦出血組的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的減少
　　2.高壓氧預(yù)適應(yīng)治療可改變CD11b和I

9、ba-1的陽(yáng)性表達(dá)比例，高壓氧預(yù)適應(yīng)組的CD11b/Iba-1的比例明顯減少。
　　結(jié)論:在大鼠腦出血后的炎癥急性期，高壓氧預(yù)適應(yīng)組能夠通過(guò)有效減少小膠質(zhì)細(xì)胞的激活來(lái)減輕腦出血早期的損傷性炎癥反應(yīng)過(guò)程。同時(shí)，高壓氧預(yù)適應(yīng)也可減少小膠質(zhì)細(xì)胞M1型的標(biāo)志物CD11b比例，這也暗示著M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的比例相對(duì)的升高。通過(guò)相對(duì)地減少小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥損傷相關(guān)M1型比例、增加神經(jīng)保護(hù)相關(guān)的M2型來(lái)發(fā)揮減輕炎癥反應(yīng)、減少神經(jīng)退行性變、促進(jìn)神經(jīng)修