人血漿組織激肽釋放酶結(jié)合蛋白Kallistatin與冠狀動脈病變程度相關(guān)性研究及可能機制初步探討.pdf

1、冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。珻AD）是一種常見多發(fā)的慢性病，且近年來，隨著人們生活水平的提高，冠心病的發(fā)病率明顯上升，對人類健康造成嚴(yán)重危害。目前確診冠心病的金標(biāo)準(zhǔn)是冠狀動脈血管造影，為一項有創(chuàng)性檢查，具有一定的風(fēng)險性，且費用較高，而目前現(xiàn)有的與冠心病嚴(yán)重程度相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物，其特異性及敏感性不能令人滿意，找尋新的相關(guān)標(biāo)志物一直是學(xué)者們關(guān)注的熱點。
　　Gensini評分考慮了冠狀動脈病變的數(shù)目、部位、狹窄程度，是較為客觀

2、的冠狀動脈評價標(biāo)準(zhǔn)。該評分法在冠狀動脈病變狹窄程度上更詳細(xì)，將冠狀動脈分成14段，根據(jù)病變血管的不同節(jié)段制訂不同的權(quán)重系數(shù)。研究者都認(rèn)為左主干，前降支近端、中段流入左心室的血流量占主導(dǎo)地位，并給予這些血管更高的權(quán)重系數(shù)。Gensini評分對冠狀動脈病變程度的評估是一種非常有效的方法，冠狀動脈病變越嚴(yán)重，Gensini評分越高，則心功能越差。Gensini評分已廣泛用于臨床試驗，通過該評分法可探討冠心病嚴(yán)重程度與某些生化指標(biāo)有無關(guān)聯(lián)。但G

3、ensini評分是基于冠脈造影結(jié)果上的綜合計算，并不能規(guī)避造影的有創(chuàng)性、風(fēng)險性、可接受性及費用問題。
　　人組織激肽釋放酶結(jié)合蛋白(Kallistatin，KS)最初是以組織激肽釋放酶結(jié)合蛋白的形式，首次被Chao等人從人血漿及人肺成纖維細(xì)胞(wi-38)和嚙齒類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(NG-108)的無血漿培養(yǎng)基中分離出。KS蛋白二級結(jié)構(gòu)中有2個重要的功能區(qū):中心反應(yīng)環(huán)和肝素結(jié)合結(jié)構(gòu)域。KS通過中央反應(yīng)環(huán)，與組織型激肽釋放酶(TK)結(jié)合

4、，參與血壓調(diào)節(jié)及內(nèi)皮細(xì)胞增殖，還可以通過其肝素結(jié)構(gòu)域在人體內(nèi)發(fā)揮多種生物學(xué)作用。KS可以與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的腫瘤壞死因子1(tumor necrosis factor1，TNFR1)競爭性結(jié)合，從而阻斷TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB及p38MARK的激活，通過抑制TNF-α誘導(dǎo)的的細(xì)胞凋亡信號通路，發(fā)揮抗炎及抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用;KS還可以通過參與多條細(xì)胞通路的調(diào)控，增加內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性，可以發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激作用。以及

5、通過提高NO及血管內(nèi)皮生長因子水平防止血管損傷，提高內(nèi)皮祖細(xì)胞的血管生成能力。這些生物學(xué)功能都提示了KS具有潛在的冠狀動脈粥樣硬化及血管損傷修復(fù)的作用。KS是Serpin家族的一員(Serp in A4)，同樣作為絲氨酸抑制劑的SerpinSerp-1，已有相關(guān)二期臨床實驗表明可能通過減少炎癥細(xì)胞浸潤，降低急性冠脈綜合癥及經(jīng)皮冠脈支架置入術(shù)后患者的血管損傷指標(biāo)（肌鈣蛋白I及CK-MB），改善患者預(yù)后。
　　血漿KS的水平在多種疾病

6、中都被證實有明顯的差異性，在腫瘤、社會獲得性肺炎合并膿毒血癥、高血壓的患者中，KS的水平是明顯降低的;而在1型糖尿病合并血管并發(fā)癥的患者中，KS的水平反而是升高的。且已有研究證實，KS可發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激及抗血管生成等生物學(xué)作用，在膿毒癥、高血壓、腫瘤、糖尿病視網(wǎng)膜病變、缺血再灌注損傷、肝纖維化等疾病中有著重要作用。但是KS與冠心病嚴(yán)重程度相關(guān)的研究中尚無報道。
　　目的：通過對冠心病患者血漿中KS水平的測定以及同冠脈狹窄的嚴(yán)重

7、程度的關(guān)系來探究KS與冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性以及潛在的診斷和治療價值，并通過研究KS對于單核細(xì)胞對內(nèi)皮細(xì)胞粘附功能的影響，初步推測KS可能通過其抗炎作用起到保護冠脈血管及延緩冠心病發(fā)生的作用。
　　方法：(1)選取151名行冠脈造影檢查的患者作為研究對象，統(tǒng)計其臨床數(shù)據(jù)及造影結(jié)果。根據(jù)冠脈病變分支結(jié)果分成四組:正常對照組、單支病變組、雙支病變組、三支病變組，應(yīng)用ELISA法測定患者血漿中KS含量;(2)根據(jù)Gensini評分評估

8、其冠脈病變程度，將患者分為四組:0、(0，20]、(20，40]、(40，160]，兩兩比較各組間患者血中KS含量的差異，并探究KS水平與Gensini評分間的相關(guān)性。(3)KS對單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附功能的影響
　　結(jié)果：(1)根據(jù)冠脈病變分支結(jié)果分成的四組中，血漿KS量分別為:對照組（95.35±32）μg/mL、單支病變組（78.19±25.27）μg/mL、雙支病變組（66.19±25.93）μg/mL、三支病變組（51.

9、84±23.26）μg/mL，各組間均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，KS水平與冠脈病變支數(shù)呈負(fù)相關(guān);(2)根據(jù)Gensini評分的分組0、(0，20]、(20，40]、(40，160]四組中，KS含量分別為(101.66±36.50)μg/mL、(77.73±25.13)μg/mL、（61.58±23.06）μg/mL、（53.80±23.92）μg/mL，KS含量在各組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01).(3)KS含量與Gensi

10、ni評分存在統(tǒng)計學(xué)上有顯著的相關(guān)性(P＜0.001，r=-0.371).(4)用0.1μM及0.5μM的KS干預(yù)TNF-α預(yù)處理的血管內(nèi)皮細(xì)胞與單核淋巴細(xì)胞之間的粘附，100倍倒置相差顯微鏡下觀察每個視野半透明細(xì)胞數(shù)量（個）:對照組，TNF-α組，TNF-α+KS（0.1μM），TNF-α+KS（0.5μM）組分別為:（65.5±13.68）、(117.6±36.88)、（93.3±23.10）、（67.2±14.09）(5)在KS對于

11、淋巴單核細(xì)胞對于血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附的影響實驗中，對照組、TNF-α組，TNF-α+KS(0.1μM)組、TNF-α+KS(0.5μM)組在100倍倒置相差顯微鏡下觀察每個視野（每組選10個視野）粘附細(xì)胞數(shù)量分別為:（65.5±13.68）個、（117.6±36.88）個、（93.3±23.10）個、（67.2±14.09）個。
　　結(jié)論：本研究首次發(fā)現(xiàn)冠心病患者血漿KS含量明顯低于正常人群，且KS含量與Gensini評分存在顯著的