miR-126對(duì)腺樣囊性癌生物學(xué)行為影響的機(jī)制研究.pdf

1、目的：淚腺腺樣囊性癌（LACC）是最常見(jiàn)的淚腺惡性上皮性腫瘤，在淚腺腫瘤中，僅次于多形性腺瘤，占29％。由于LACC具有惡性程度高，易復(fù)發(fā)，易轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特點(diǎn)，目前對(duì) LACC的治療主要采用以手術(shù)切除為主，術(shù)后輔以放化療的綜合治療方案，但該方法對(duì)腫瘤局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的控制尚不理想。微小RNA是一類長(zhǎng)度為18~25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性單鏈非編碼小分子RNA，通過(guò)與靶基因的mRNA堿基配對(duì)，使mRNA降解或抑制mRNA的翻譯，參與細(xì)胞的增殖、

2、分化和凋亡等過(guò)程。已有報(bào)道m(xù)iR-126作為抑癌因子，在多種腫瘤中均有下調(diào)，其抑制作用及機(jī)制在肺癌、乳腺癌、胃癌等中均得到證實(shí)，但在LACC中尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究miR-126在腺樣囊性癌中的表達(dá)及其作用和可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：首先，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)miR-126在腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移株ACC-M和低轉(zhuǎn)移株 ACC-2細(xì)胞中的差異表達(dá)；然后構(gòu)建 pcDNA3/pri-miR-126質(zhì)粒、pSilencer/ant

3、igo-miR-126質(zhì)粒，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)兩種質(zhì)粒的有效性，同時(shí)在熒光顯微鏡下檢測(cè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率；之后，在腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-M中，過(guò)表達(dá)或封閉miR-126后，通過(guò)MTT、細(xì)胞集落形成、遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè) ACC-M細(xì)胞表型的變化；最后，應(yīng)用生物信息學(xué)方法篩選出VEGF-A為miR-126的候選靶基因，通過(guò)Western blot技術(shù)檢測(cè)在miR-126水平不同的ACC-M各組細(xì)胞中靶基因蛋白水平的變化。
　　結(jié)

4、果：Real-time PCR結(jié)果顯示，miR-126在腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移株ACC-M中的表達(dá)明顯低于低轉(zhuǎn)移株 ACC-2；轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光，證明轉(zhuǎn)染成功；分別轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)miR-126或封閉miR-126質(zhì)粒，通過(guò)qRT-PCR發(fā)現(xiàn)ACC-M細(xì)胞中miR-126的表達(dá)水平出現(xiàn)明顯提高或下降；在ACC-M細(xì)胞中，過(guò)表達(dá) miR-126增強(qiáng)其功能后，細(xì)胞生長(zhǎng)活性下降，集落形成能力明顯降低，遷移與侵襲能力亦明顯下降，而封

5、閉 miR-126后則結(jié)果相反；通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)靶基因篩選，結(jié)果表明，VEGF-A為miR-126的候選靶基因，Western blot結(jié)果表明，miR-126能夠影響VEGF-A蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：miR-126在腺樣囊性癌細(xì)胞中低表達(dá)；在ACC-M細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-126能夠抑制細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力，發(fā)揮抑癌基因的作用；而且通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)表明，miR-126與VEGF-A存在負(fù)性調(diào)控作用。通