MiR-126對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的作用及機(jī)制.pdf

1、作為人體呼吸器官的肺，極容易受到外界環(huán)境影響。因此，該器官常常面臨直接或間接的來(lái)自各種有害物質(zhì)損害的風(fēng)險(xiǎn)。直接肺損傷涉及疾病病程，主要通過(guò)肺部引起損傷，如彌漫性肺部感染（細(xì)菌、病毒和真菌性肺炎）、肺挫傷、溺水、胃內(nèi)容物吸入、吸入有毒物質(zhì)或高氧等；間接肺損傷，如敗血癥和全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）、休克、嚴(yán)重非胸部創(chuàng)傷、急性胰腺炎、輸血相關(guān)性急性肺損傷（tr

2、ansfusion-related acute lung injury，TRALI）、彌散性血管內(nèi)凝血（disseminated or diffuse intravascular coagulation，DIC）和燒傷[1]。這些直接或間接損害觸發(fā)的最終結(jié)果往往是導(dǎo)致急性肺損傷（acute lung injury，ALI）的發(fā)生，若病情惡化可迅速發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合癥（acute respiratory distress syndr

3、ome，ARDS）。盡管近些年來(lái)機(jī)械通氣的治療干預(yù)手段得以普遍使用，ALI/ARDS的炎性病理生理學(xué)也有了更好的了解，但是許多患者仍然最終進(jìn)展到呼吸衰竭的狀態(tài)，導(dǎo)致死亡率增加[2]。ALI/ARDS發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，其中炎癥反應(yīng)是其主要機(jī)制之一。自噬是參與清除損傷的細(xì)胞器或蛋白質(zhì)，通過(guò)回收細(xì)胞溶質(zhì)大分子和細(xì)胞器以提供必要營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)的穩(wěn)態(tài)機(jī)制，自噬在各種肺部疾病的功能作用已在體外和體內(nèi)進(jìn)行了研究。有報(bào)道顯示，通過(guò)增強(qiáng)自噬活性可以保護(hù)膿毒癥誘

4、發(fā)的急性肺損傷。在損傷之前和之后，自噬的激活可以顯著減少肺部炎癥，改善肺細(xì)胞生物功能，并減輕與ALI相關(guān)的損傷，然而自噬也是一把雙刃劍，在參與疾病的病理過(guò)程中，自噬過(guò)度表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壞死，引起組織損害，造成機(jī)體損傷。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴miR-126a-3p與miR-126a-5p效價(jià)比較檢測(cè)：選取三月齡健康雄性ICR小鼠24只，隨機(jī)分為Control組、LPS組、miR-126a-3p組以及miR-126a-5p組，每組

5、各6只。Control組和LPS組靜脈給予脂質(zhì)納米顆粒后腹腔注射等劑量生理鹽水和LPS（10mg/kg），miR-126a-3p組以及miR-126a-5p組分別在靜脈給予mmu-miR-126a-3p（1mg/kg）、mmu-miR-126a-5p（1mg/kg）的同時(shí)腹腔注射LPS（10mg/kg）。LPS注射24h后以雙重蛋白追蹤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺微血管內(nèi)皮滲透性，結(jié)果顯示與 Control組相比，LPS組小鼠微血管內(nèi)皮滲透性明顯增高（P

6、＜0.01）；miR-126a-3p組小鼠微血管內(nèi)皮滲透性與LPS組相比降低（P＜0.01）；miR-126a-5p組小鼠滲透性較 LPS組相比降低（ P＜0.01），但程度不如miR-126a-3p組，故miR-126a-3p效果優(yōu)于miR-126a-5p。⑵LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI模型建立：選取三月齡健康雄性ICR小鼠48只，其中24只隨機(jī)均分為4組，Negative Control組、LPS組、LPS干預(yù)組：miR-126a-3p

7、mimic LPS（miR-m-LPS），miR-126a-3pantagomir LPS(miR-a-LPS)兩組。LPS組靜脈在給予脂質(zhì)納米顆粒后腹腔注射LPS（10mg/kg），Negative Control組與LPS干預(yù)組在靜脈給予Negative Control（1mg/kg）、mmu-miR-126a-3p（1mg/kg）、mmu-miR-126a-3p抑制劑（1mg/kg）的同時(shí)，Negative Control組腹腔注

8、射生理鹽水，LPS干預(yù)組腹腔注射LPS。LPS注射24h后，檢測(cè)微血管內(nèi)皮通透性，收集小鼠肺組織、血漿等樣本。雙重蛋白追蹤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)微血管內(nèi)皮通透性，結(jié)果顯示與Negative Control組相比，LPS組小鼠微血管內(nèi)皮滲透性明顯增高（P＜0.01）；與LPS組相比，miR-m-LPS組小鼠微血管內(nèi)皮滲透性降低（ P＜0.05）；miR-a-LPS組小鼠微血管內(nèi)皮滲透性較 miR-m-LPS組增高（P＜0.05）。肺組織濕/干重比實(shí)驗(yàn)結(jié)

9、果顯示，LPS組小鼠W/D顯著高于Negative Control組（P＜0.01）；在 LPS組干預(yù)組中，miR-m-LPS組 W/D低于 LPS組（P＜0.05），miR-a-LPS組W/D結(jié)果顯著高于miR-m-LPS組（P＜0.05）。⑶另24只ICR小鼠經(jīng)同樣分組處理后采用Elisa方法測(cè)定肺組織及血漿中炎癥因子TNF-α、MCP-1、IL-6表達(dá)水平變化，結(jié)果顯示LPS組小鼠肺組織及血漿中TNF-α、MCP-1、IL-6釋放

10、明顯增加（P＜0.01），miR-m-LPS組炎癥因子水平顯著降低（P＜0.01）。采用微量酶標(biāo)法檢測(cè)髓過(guò)氧化物酶（MPO）活力變化，結(jié)果表明，miR-m-LPS組小鼠肺組織MPO活力顯著低于LPS組（P＜0.01）， miR-a-LPS組較miR-m-LPS組顯著升高（P＜0.01）。采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織中自噬蛋白LC3及LC3-Ⅱ的表達(dá)。結(jié)果表明，LPS組肺組織LC3蛋白表達(dá)水平高于Negative Con