復(fù)方參菇七蟾(QHF復(fù)方)顆粒的制備及其抗腫瘤的藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：本課題是在課題組前期大量研究的基礎(chǔ)上，為了更好的將QHF復(fù)方用于臨床抗腫瘤方向，對(duì)QHF復(fù)方進(jìn)行劑型優(yōu)化，制成參菇七蟾顆粒劑，并完成質(zhì)量控制。同時(shí)用體外實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方式來進(jìn)行參菇七蟾顆粒抗腫瘤的藥效學(xué)評(píng)價(jià)。
　　方法：（1）藥劑學(xué)部分：取干蟾皮，通過水提醇沉法來提取、分離純化，得到華蟾素；三七用大孔吸附樹脂法分離純化，得到三七總皂苷；高效液相法（HPLC）鑒定華蟾素、三七總皂苷；按QHF復(fù)方配比，加入香菇多糖，人參

2、皂苷Rg3，制成參菇七蟾顆粒劑，并完成鑒定與相關(guān)質(zhì)量控制。（2）藥效學(xué)部分：1）MTT法檢測(cè)參菇七蟾顆粒對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC7901、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響。2）對(duì)H22腋下瘤的作用研究：KM小鼠40只，每只右側(cè)腋窩皮下接種瘤細(xì)胞液0.2ml。接種后隨機(jī)分為4組：參菇七蟾顆粒（S）組、原復(fù)方（QHF）組、順鉑（DDP）組、模型（M）組。接種第二天開始給藥，末次給藥次日，頸椎脫臼處死小鼠取腫瘤，計(jì)算抑瘤率；取

3、小鼠胸腺、脾臟，計(jì)算胸腺、脾指數(shù)；采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量；Western blot檢測(cè)小鼠腫瘤組織中P53、CD31、Bax-bcl2、HGF-cMet的表達(dá)；免疫組化檢查小鼠腫瘤組織中ERK-pERK的表達(dá)。3）對(duì)H22腹水瘤的作用研究：KM小鼠40只，每只腹腔接種瘤液0.2ml。隨機(jī)分為4組：S組、QHF組、DDP組、M組。接種第二天開始給藥，觀察小鼠的死亡情況并記錄，計(jì)算每組小鼠的

4、平均生存時(shí)間和生命延長(zhǎng)率。
　　結(jié)果：（1）完成了參菇七蟾顆粒制備、鑒定劑質(zhì)量控制。（2）1）參菇七蟾顆粒對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC7901、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響：參菇七蟾顆粒對(duì)三種腫瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，且具有時(shí)間依耐性，與原復(fù)方比較，雖存在差異，但基本不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2）對(duì)H22腋下瘤的作用研究：DDP、S、QHF組的抑瘤率分別為56.67％、36.05%、42.00%；與M組相比，S、QHF組血

5、清中的IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量均升高（P＜0.01）；與M組相比，S組Bax的表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）， bcl2的表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.01）；與M組相比，S組，QHF組、DDP組HGF的表達(dá)均有明顯降低（P<0.01）；與M組相比，DDP組、S組、QHF組，均能明顯下調(diào)腫瘤組織中P53的表達(dá)（P<0.01）；與M組相比，S組小鼠腫瘤組織中CD31的表達(dá)明顯降低（P<0.01）。3）對(duì)H22腹水瘤的作用研究：與M組相

6、比，用藥組的平均生存時(shí)間均有明顯的延長(zhǎng)（P<0.01）；S組、QHF組的生存時(shí)間比DDP組長(zhǎng)（P<0.05）；而S組與QHF組之間，雖有差異，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：（1）完成參菇七蟾顆粒劑有效成分的提取分離純化及鑒定，按顆粒劑的制備工藝制成參菇七蟾顆粒，并進(jìn)行了相關(guān)質(zhì)量控制。（2）體外實(shí)驗(yàn)說明參菇七蟾顆?？梢酝瑫r(shí)對(duì)多種不同的腫瘤產(chǎn)生效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)說明參菇七蟾顆粒主要是從提高機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡