基于工具酶信號放大技術檢測單堿基突變和地溝油的研究.pdf

1、在生化分析中有許多待檢測的物質由于其本身含量較低，無法用當前常規(guī)的方法檢測出來，因此發(fā)展高靈敏的信號放大技術對不能直接擴增的低濃度待測物質進行檢測，在當前生化分析研究中尤為重要。在本論文的研究中，以工具酶的信號放大技術為基礎，結合化學發(fā)光檢測和熒光定量PCR檢測技術，分別提出了對單堿基突變和地溝油快速檢測的方法。其主要內容如下：
　　1.利用鏈置換循環(huán)放大化學發(fā)光法檢測單堿基突變
　　本章基于鏈置換循環(huán)放大和磁珠分離技術建立

2、了一種操作簡便、快速，室溫下可以高靈敏度和高特異性的檢測單堿基突變的化學發(fā)光生物傳感器。本章中設計單堿基突變位點為T4 DNA連接酶的連接位點，目標DNA若為突變體DNA，T4 DNA連接酶則將發(fā)夾探針與報告探針連接起來，再通過Klenow Fragment(exo-)聚合酶進行信號的循環(huán)放大，最終檢測化學發(fā)光信號；而當目標DNA為野生型DNA，T4 DNA連接酶則不能將兩條探針連接起來，也無法進行信號循環(huán)放大，因此檢測不到化學發(fā)光信號

3、。該方法利用T4 DNA連接酶和KlenowFragment(exo-)聚合酶進行化學發(fā)光信號的循環(huán)放大，最終實現了對DNA單堿基突變高靈敏度、高特異性的檢測，其檢測限為1.3×10-16 mol/L(3σ)。
　　2.基于外源動物特征DNA熒光定量PCR快速檢測地溝油的研究
　　本章中構建了一種基于線粒體特征序列和熒光定量PCR技術實現地溝油快速、靈敏檢測的方法。本章轉換檢測的理念和檢測對象，以樣品油中外源動物特征DNA作