基于工具酶信號(hào)放大技術(shù)檢測(cè)單堿基突變和地溝油的研究.pdf

1、在生化分析中有許多待檢測(cè)的物質(zhì)由于其本身含量較低，無(wú)法用當(dāng)前常規(guī)的方法檢測(cè)出來(lái)，因此發(fā)展高靈敏的信號(hào)放大技術(shù)對(duì)不能直接擴(kuò)增的低濃度待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，在當(dāng)前生化分析研究中尤為重要。在本論文的研究中，以工具酶的信號(hào)放大技術(shù)為基礎(chǔ)，結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)和熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)，分別提出了對(duì)單堿基突變和地溝油快速檢測(cè)的方法。其主要內(nèi)容如下：
　　1.利用鏈置換循環(huán)放大化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)單堿基突變
　　本章基于鏈置換循環(huán)放大和磁珠分離技術(shù)建立

2、了一種操作簡(jiǎn)便、快速，室溫下可以高靈敏度和高特異性的檢測(cè)單堿基突變的化學(xué)發(fā)光生物傳感器。本章中設(shè)計(jì)單堿基突變位點(diǎn)為T(mén)4 DNA連接酶的連接位點(diǎn)，目標(biāo)DNA若為突變體DNA，T4 DNA連接酶則將發(fā)夾探針與報(bào)告探針連接起來(lái)，再通過(guò)Klenow Fragment(exo-)聚合酶進(jìn)行信號(hào)的循環(huán)放大，最終檢測(cè)化學(xué)發(fā)光信號(hào)；而當(dāng)目標(biāo)DNA為野生型DNA，T4 DNA連接酶則不能將兩條探針連接起來(lái)，也無(wú)法進(jìn)行信號(hào)循環(huán)放大，因此檢測(cè)不到化學(xué)發(fā)光信號(hào)

3、。該方法利用T4 DNA連接酶和KlenowFragment(exo-)聚合酶進(jìn)行化學(xué)發(fā)光信號(hào)的循環(huán)放大，最終實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA單堿基突變高靈敏度、高特異性的檢測(cè)，其檢測(cè)限為1.3×10-16 mol/L(3σ)。
　　2.基于外源動(dòng)物特征DNA熒光定量PCR快速檢測(cè)地溝油的研究
　　本章中構(gòu)建了一種基于線粒體特征序列和熒光定量PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)地溝油快速、靈敏檢測(cè)的方法。本章轉(zhuǎn)換檢測(cè)的理念和檢測(cè)對(duì)象，以樣品油中外源動(dòng)物特征DNA作