抗除草劑bar基因?qū)π←湹倪z傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、基因槍法是小麥遺傳轉(zhuǎn)化中應用最成熟、最廣泛的方法。然而基因槍法有成本高，轉(zhuǎn)化效率低等缺點。1992年Vasil等首次用基因槍法轉(zhuǎn)化小麥獲得成功，隨后，Cheng等用農(nóng)桿菌介導法(1997)首次獲得正常的轉(zhuǎn)基因小麥植株，夏光敏等(1999)獲得農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)基因小麥植株，葉興國(2001)獲得了小麥轉(zhuǎn)化再生植株。 由于小麥基因型不同，轉(zhuǎn)化體系有很大差異，農(nóng)桿菌介導的外源基因轉(zhuǎn)化小麥的方法目前還不成熟，但相對其它方法，該方法有很多優(yōu)

2、點：1．轉(zhuǎn)化效率高；2．拷貝數(shù)少，單拷貝出現(xiàn)頻率大；3．能夠轉(zhuǎn)移較大的DNA片斷；4．結(jié)構變化較小，在轉(zhuǎn)基因表達和遺傳穩(wěn)定性方面具有明顯的優(yōu)越性；5．操作簡單、成本低。但其轉(zhuǎn)化效率最高也只有百分之幾，遠遠低于雙子葉植物的轉(zhuǎn)化頻率，也低于水稻、玉米的轉(zhuǎn)化頻率。鑒于農(nóng)桿菌介導法的諸多優(yōu)點，對于基因組非常復雜的小麥而言，進一步加強對該轉(zhuǎn)化體系的研究具有重要意義。 本實驗選用優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)小麥品種洛陽8716和綿陽19幼胚愈傷作為受體材料，以

3、pCAMBIA3301為載體，GV3101，EHA105，LBA4404農(nóng)桿菌為供體材料進行侵染過程的優(yōu)化研究。采用三種菌株，四個濃度梯度：OD<,600>=0.2，0.5，0.7，1.0；三個時間參數(shù)：10，30，60min；一共36個處理，每個處理4個重復，經(jīng)統(tǒng)計得到轉(zhuǎn)化率為0.45％。本實驗獲得了初步的較優(yōu)轉(zhuǎn)化體系：1完成了pCAMBIA3301對農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化及酶切鑒定；2羧芐青霉素對農(nóng)桿菌除菌濃度的篩選(350mg/L)；3確定