抗除草劑als、bar基因轉(zhuǎn)化棉花華抗6號和06S62的研究.pdf

1、棉花是重要的經(jīng)濟(jì)作物，由于棉花生產(chǎn)長期受到雜草侵害，造成的直接經(jīng)濟(jì)損失占作物總產(chǎn)值的10％～20％左右。棉花基因工程的發(fā)展大大促進(jìn)了抗除草劑、抗蟲、抗病、抗逆和高品質(zhì)纖維等棉花品種的培育，但轉(zhuǎn)基因棉花體系仍然存在著許多尚未解決的問題，如再生品種少、胚狀體萌發(fā)率偏低、畸形率較高、再生周期長等問題，所以，不斷發(fā)展新的再生體系和拓寬棉花轉(zhuǎn)基因的品種數(shù)量是目前棉花基因工程發(fā)展的新趨勢。
　　 本試驗(yàn)以六種不同基因型棉花為試材，探討棉花再

2、生過程中，各種因素對棉花組織培養(yǎng)再生體系的影響，以建立具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性、易于再生、有高再生頻率的棉花基因轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。同時(shí)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗除草劑als、bar基因轉(zhuǎn)入棉花中，并對棉花莖尖遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，為完善農(nóng)桿菌介導(dǎo)抗除草劑棉花莖尖遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，選育出抗除草劑的棉花新品種提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1.從供試的六種基因型棉花中篩選出兩種有胚性愈傷組織產(chǎn)生的基因型。分別是華抗6

3、號和06S62。
　　 2.以華抗6號和06S62為材料，優(yōu)化再生體系。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的適宜配方為：MSB+30 g/L葡萄糖+0.1mg/L2,4-D+0.1mg/LZT+8g/L瓊脂；分化培養(yǎng)基的適宜配方為：MSB+30g/L葡萄糖+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+8g/L瓊脂；生根培養(yǎng)基的適宜配方為：MSB+30g/L葡萄糖+0.1mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+10g/L瓊脂+2g/L活性炭。<

4、br>　　 3.農(nóng)桿菌LBA4404轉(zhuǎn)化als基因的適宜條件，華抗6號的菌液濃度OD6000.9、浸染時(shí)間為10 min、負(fù)壓處理10 min、添加500μmol/LAS；06S62的菌液濃度OD6000.9、浸染時(shí)間15 min、負(fù)壓處理15 min、添加500μmol/L AS。
　　 4.農(nóng)桿菌LBA4404轉(zhuǎn)化bar基因的適宜條件，華抗6號的菌液濃度OD6000.7、浸染時(shí)間為10 min、負(fù)壓處理10 min、添加5

5、00μmol/L AS；06S62的菌液濃度OD6000.9、浸染時(shí)間15 min、負(fù)壓處理15 min、添加500μmol/L AS。
　　 5.通過轉(zhuǎn)化als基因，華抗6號獲得了25株抗性幼苗，06S62獲得了17株抗性幼苗，分別隨機(jī)選取10株抗性幼苗，取葉片做PCR檢測，均有陽性植株產(chǎn)生且最高轉(zhuǎn)化率為5.71％。
　　 6.通過轉(zhuǎn)化bar基因，華抗6號獲得了30株抗性幼苗，06S62獲得了22株抗性幼苗，分別隨機(jī)選