中國(guó)大陸獼猴屬物種資源快速鑒定方法的研究.pdf

1、中國(guó)大陸獼猴屬物種資源已十分稀少并具減少趨勢(shì)，在野外調(diào)查和保護(hù)執(zhí)法工作中獲得的獼猴屬疑似樣品往往是污染、腐敗、殘缺不全（如毛發(fā)、骨骼、蹄甲、臟器、肌肉纖維等）或極微量的檢材，難以檢查辨認(rèn)。為了更有力的保護(hù)獼猴屬野生動(dòng)物，打擊非法走私和狩獵，建立對(duì)我國(guó)大陸獼猴屬物種的分子生物學(xué)鑒定技術(shù)是十分有意義的。 試驗(yàn)一：本試驗(yàn)主要采用非損傷性的方法，從中國(guó)大陸四種獼猴屬物種糞樣中提取DNA，同時(shí)從Genbank下載一些常見(jiàn)動(dòng)物、獼猴屬5種動(dòng)

2、物及同科相近屬、同目相近科動(dòng)物的cyt b基因序列，利用軟件設(shè)計(jì)并合成獼猴屬通用引物1對(duì)（Ms/Ma）、豚尾猴特異性引物1對(duì)（Ts/Ta）、獼猴特異性引物（Ys/Ya）、短尾猴特異性引物2對(duì)（Ds1/Da1、Ds2/Da2）、熊猴特異性引物2對(duì)（Xs1/Xa1、Xs2/Xa2），并通過(guò)大量試驗(yàn)對(duì)其特異性、穩(wěn)定性和敏感性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明：通用引物Ma、Ms對(duì)我國(guó)獼猴屬物種DNA特異，只能特異性地?cái)U(kuò)增獼猴屬物種DNA，而對(duì)一些常見(jiàn)動(dòng)物及近

3、源動(dòng)物的DNA不能擴(kuò)增；其它幾對(duì)引物也具有良好的特異性和穩(wěn)定性。尤其是敏感性試驗(yàn)，測(cè)出了各引物能檢測(cè)出該物種所需的最低濃度。 試驗(yàn)二：利用Primer Express軟件設(shè)計(jì)合成Taqman探針：豚尾猴1條（Ts/Ta）、獼猴3條（Ms0/Ma0、Ms1/Ma1、Ms2/Ma2）、短尾猴1條（Ds1/Da1）、熊猴1條（Xs1/Xa1），經(jīng)大量試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果表明：獼猴探針（Ms0/Ma0）、豚尾猴探針（Ts/Ta）和短尾猴（Ds

4、1/Da1）探針特異性很好，能將其與中國(guó)大陸其它獼猴屬區(qū)分開(kāi)來(lái)。獼猴探針（Ms1/Ma1、Ms2/Ma2）能首先將獼猴、短尾猴與熊猴、豚尾猴區(qū)分開(kāi)，再利用短尾猴探針（Ds1/Da1）將獼猴和短尾猴區(qū)分開(kāi)即可。本試驗(yàn)首次采用了分步鑒定的方法，這對(duì)其它野生動(dòng)物的鑒定具有借鑒意義。 試驗(yàn)三：從多種微量檢材：獼猴毛發(fā)、肌肉，短尾猴毛發(fā)、血液中提取DNA，與從糞樣中取得的DNA模板做比較，檢驗(yàn)結(jié)果的一致性。結(jié)果表明：從毛發(fā)、肌肉、血液中獲

5、取的DNA與從糞樣中取得的DNA檢測(cè)結(jié)果具有一致性。表明本方法穩(wěn)定、可靠，從而達(dá)到對(duì)獼猴屬微量組織鑒定的目的。 試驗(yàn)四：對(duì)瓊脂糖凝膠電泳跑的比較亮的目的條帶進(jìn)行切膠回收并測(cè)序，看結(jié)果是否是需要的目的條帶。結(jié)果表明，測(cè)序所得的序列與網(wǎng)上發(fā)布的序列結(jié)果一致，即為所要的目的條帶。同時(shí)還設(shè)計(jì)測(cè)序引物，測(cè)得了四種獼猴屬物種的部分Cytb序列，為以后的研究提取科學(xué)依據(jù)。 本試驗(yàn)建立了我國(guó)大陸獼猴屬4種動(dòng)物的分子生物學(xué)查驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室確證