日本血吸蟲(chóng)（中國(guó)大陸株）尾蚴的性別鑒定

1、登記序號(hào)項(xiàng)目編號(hào)科研設(shè)計(jì)書項(xiàng)目名稱：日本血吸蟲(chóng)尾蚴性別鑒定應(yīng)用技術(shù)的研究承擔(dān)單位：?jiǎn)挝坏刂罚亨]政編碼：開(kāi)戶行：帳號(hào)：1103021109000077488項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：電話：職務(wù)職稱：填報(bào)日期2004年7月28日江蘇省地方病協(xié)會(huì)二○○四年制和感染比率以及減蟲(chóng)率（減雌率）和減卵率的正確評(píng)估等均具有重要的意義。同時(shí)為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)適合我國(guó)國(guó)情的日本血吸蟲(chóng)尾蚴性別鑒定試劑盒打下基礎(chǔ)。二、主要研究?jī)?nèi)容、關(guān)鍵技術(shù)、目標(biāo)：1、研究?jī)?nèi)容1.1用代表性差異分

2、析方法獲得日本血吸蟲(chóng)雌性基因組DNA特異性序列。1.2對(duì)特異性序列測(cè)序，設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增。1.3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)建立一種簡(jiǎn)單、快速的日本血吸蟲(chóng)尾蚴性別鑒定方法。2、關(guān)鍵技術(shù)2.1日本血吸蟲(chóng)雄蟲(chóng)、雌蟲(chóng)基因組DNA的提取2.2代表性差異分析方法（RDA）和PCR。2.3低熔點(diǎn)凝膠回收雌性特異性片段2.4大腸桿菌E.coliTG1感受態(tài)細(xì)胞的制備技術(shù)、DNA的重組和克隆篩選、重組DNA的轉(zhuǎn)化及質(zhì)粒DNA的提取。2.5DNA探針的制備和Southe

3、rnblot驗(yàn)證方法2.6雌性特異性序列測(cè)序和引物設(shè)計(jì)。3、目標(biāo)建立一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的日本血吸蟲(chóng)尾蚴性別鑒定方法。三、研究方法及技術(shù)路線1.用傳統(tǒng)方法確定尾蚴的性別，獲取單性尾蚴樣本1.1以逸蚴法篩選出陰性釘螺用于感染，所有用于實(shí)驗(yàn)的螺均篩選3次。1.2以單只毛蚴感染單只釘螺；螺感染后在光照培養(yǎng)箱中養(yǎng)殖90天或在春夏季室溫條件下養(yǎng)殖100天。逸蚴法篩選出陽(yáng)性釘螺，取單性尾蚴感染小鼠，35天后剖殺，取成蟲(chóng)確定尾蚴的性別。并分別收集單性