嗜熱脫氮芽孢桿菌新型雙性SOD基因的生理生化功能研究.pdf

1、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，簡稱SOD）是一種金屬酶類，它可分為四類，分別是Cu/Zn-SOD，Mn-SOD，F(xiàn)e-SOD和Ni-SOD。SOD是一種重要的氧自由基清除劑，能催化超氧陰離子（O2·-）的歧化反應(yīng)。SOD與多種人類疾病及衰老有關(guān)，因而是一種具有較大潛力的藥物酶。
　　 NG80-2為一株在石油開采工業(yè)中具有廣泛應(yīng)用前景的嗜熱脫氮芽孢桿菌，分離白天津大港油田。NG80-2耐高溫，可乳化并

2、降解原油，可明顯提高石油產(chǎn)量。
　　 本實驗室在獨立完成NG80-2全基因組測序工作后，利用生物信息學(xué)方法對其進(jìn)行基因注釋和序列分析的過程中，發(fā)現(xiàn)該菌株存在一個特殊的超氧化物歧化酶基因（GT2215）。經(jīng)過進(jìn)一步blast比對，發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白質(zhì)C端237位點到449位點之間的序列與常溫菌中的同工酶序列同源性高達(dá)95％，而N端序列為其特有，且功能尚不明確。本文利用PCR方法分別構(gòu)建了全長SOD及其C端蛋白（SOD-cut）的

3、重組質(zhì)粒pETSOD、pETSOD-cut。在不同溫度下，對表達(dá)蛋白的酶活性進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)：SOD在25℃到80℃之間有活性，最適溫度為70℃，且在其最適溫度下，酶活力高達(dá)1000U/mg：SOD-cut為溫度敏感型，最適溫度25℃，隨著溫度升高，酶活性逐漸降低。
　　 對SOD和SOD-cut進(jìn)行原子吸收光譜測定發(fā)現(xiàn)該二者均為雙性超氧化物歧化酶，活性中心金屬離子既含有Mn又含有Fe，并且Fe/Mn比值約為5。進(jìn)行金屬離子重構(gòu)及