枯草芽孢桿菌產醬香相關功能基因的篩選及初步研究.pdf

1、為了分離枯草芽孢桿菌產醬香相關基因，以產醬香的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）E20菌株（tester）與不產醬香的枯草芽孢桿菌10075菌株（driver）為材料，采用抑制消減雜交技術（suppression subtracted hybridization，SSH）比較它們在基因組上的差異，成功構建了枯草芽孢桿菌產醬香的差異基因文庫。初步獲得了77個差異基因片段，對獲得的差異基因片段進行測序及生物信息學分析。

2、>　　Blast分析顯示，有65條差異基因片段獲取了準確的注釋，平均相似度98％。在65個序列中，26個是酶，這些酶中有19個酶在KEGG數據庫中共發(fā)現245個代謝產物。首先，在已發(fā)表的文獻中，提取了與45個與醬香形成相關的代謝物；其次，通過名字匹配獲取其英文名后通過HMDB和KEGG數據庫進行轉換；最后，使用KEGG信號通路進行關聯(lián)分析。對這些代謝物分別進行富集分析，找出對應的代謝通路。通過文庫測序基因、基因中找到的酶、酶的代謝產物、

3、酶參與的代謝通路、酶的代謝產物參與的代謝通路；已發(fā)表文章中找到的醬香相關代謝產物、相關代謝產物對應的代謝通路，相關代謝產物對應的酶以及一些已知的醬香相關基因等信息來構建多層次共同調控網絡。結果顯示：
　　1、文庫測序基因參與的代謝途徑有苯丙氨酸代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝、氮代謝、組氨酸代謝、淀粉和蔗糖代謝等；
　　2、文庫測序基因的代謝物主要包括大量氨基酸，糖類，乙酸，丁酸，丙酸以及兒茶酚等小分子化合物；
　　3、文庫

4、測序基因的代謝物與乙偶姻及alsS的代謝存在一定的相關性；
　　4、文庫測序基因的代謝物為美拉德反應提供前體物質及反應條件；
　　本次實驗采用抑制性消減雜交技術成功地分離出了與產醬香相關的基因序列，其中某些差異基因片斷直接顯示了其在產香味物質前體中的潛力，如苯丙氨酰tRNA合成酶的β鏈（pheT）、DNA旋轉酶A亞單位（gyrA）和HTH型轉錄調控因子yybE（yybE）等，與之相關的核酸片段是菌株能否產醬香的重要原因，雖然