β-淀粉樣蛋白增加Wistar大鼠癲癇發(fā)作易感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　研究β-淀粉樣蛋白（Beta amyloid protein，Aβ）對(duì)癲癇（Epilepsy,EP）病理機(jī)制發(fā)生發(fā)展的影響。從疾病發(fā)病機(jī)制的角度，探討EP發(fā)作易感性增加與阿爾茨海默氏病（Alzheimer’s disease，AD）病理改變之間的相關(guān)性。
　　方法:
　　選用6-8周成年Wistar大鼠40只，隨機(jī)分為β-淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）+匹羅卡品（Pilocarpine，PILO）組、A

2、β1-42組、磷酸鹽緩沖液（Phosphate buffer solution，PBS）+PILO組、PBS組，每組各10只。采用腦立體定位儀將Aβ1-42注入Wistar大鼠海馬CA3區(qū)，2周后觀察大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄逃避潛伏期、目標(biāo)象限內(nèi)游泳時(shí)間比例和穿越平臺(tái)次數(shù)，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件，檢測(cè)大鼠AD模型是否成功。建模成功后通過腹腔（Intraperitoneal，IP）注射氯化鋰-匹羅卡品（Lithium chloride

3、 Pilocarpine，LI-PILO）制備大鼠慢性EP發(fā)作模型，依據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，記錄EP發(fā)作潛伏期（達(dá)到IV級(jí)及以上發(fā)作所需時(shí)間）、發(fā)作程度和死亡率；采用改良的Timm’s染色方法觀察各組大鼠海馬齒狀回（Dentate gyrus,DG）苔蘚纖維芽生（Mossy fiber sprouting,MFS）水平。
　　結(jié)果:
　　制備大鼠AD模型：注射Aβ1-42后，AD模型組和PBS對(duì)照組大鼠各死亡1只，解剖未發(fā)

4、現(xiàn)明顯人為死亡原因，推測(cè)可能的致死原因?yàn)榇笫笾g存在個(gè)體差異；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果，AD模型組與PBS對(duì)照組大鼠相比逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)（P＜0.01），目標(biāo)象限內(nèi)游泳時(shí)間比例縮短（P＜0.05），穿越平臺(tái)的次數(shù)也明顯減少（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明AD模型制備成功。制備大鼠EP模型：依據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，Aβ1-42+PILO組與PBS+PILO組相比，EP發(fā)作潛伏期顯著縮短（P＜0.01），發(fā)作程度更重

5、（P＜0.05)；Aβ1-42+PILO組與PBS+PILO組、PBS組相比死亡率均顯著增加,分別為P=0.0294、P=0.0108。大鼠腦組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)：改良的Timm’s染色結(jié)果顯示，Aβ1-42+PILO組與PBS+PILO組比較海馬DG MFS染色強(qiáng)度顯著增強(qiáng)（P＜0.05）；在Aβ1-42組也觀察到海馬DG MFS染色強(qiáng)度增強(qiáng)，但和PBS+PILO組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；PBS+PILO組和PBS組比較MFS染色

6、強(qiáng)度顯著增強(qiáng)（P＜0.01）；Aβ1-42組和PBS組比較MFS染色強(qiáng)度也顯著增強(qiáng)（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　通過海馬CA3區(qū)注射Aβ1-42，可以導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)與海馬有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶功能受損，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)從行為學(xué)上進(jìn)一步驗(yàn)證上述功能障礙，證明Aβ可以誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)癡呆樣行為改變。在Aβ存在的基礎(chǔ)上誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)EP發(fā)作易感性是增加的，說明Aβ對(duì)于EP發(fā)生有一定的促進(jìn)作用,從疾病病理學(xué)角度闡明AD與EP發(fā)作密

7、切相關(guān)。組織化學(xué)染色觀察到Aβ1-42+PILO組海馬DG MFS存在高強(qiáng)度染色，進(jìn)一步從病理生理學(xué)機(jī)制上驗(yàn)證Aβ誘導(dǎo)大鼠EP發(fā)作易感性增加的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)可能與MFS水平顯著增加有關(guān)。盡管在Aβ1-42組沒有EP發(fā)作，該組大鼠海馬DG也出現(xiàn)MFS染色增強(qiáng)，這表明MFS不僅是EP發(fā)作的結(jié)果，而是代表在這些大鼠中固有的異常網(wǎng)絡(luò)連接。在EP發(fā)作的“二次打擊”學(xué)說中，Aβ可能的作用機(jī)制是導(dǎo)致大腦出現(xiàn)第一次腦損傷。EP發(fā)作易感性增加與AD發(fā)病機(jī)制之間