上皮性卵巢癌組織中Atg5、Beclin1、P53的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、卵巢癌是在婦科日常的臨床工作中最經(jīng)常遇見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位于宮頸癌與子宮內(nèi)膜癌之下，但由于缺乏有效的早期診斷方法且卵巢癌具有易播散轉(zhuǎn)移、早期患者無明顯癥狀等特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)時(shí)大多數(shù)已處于晚期，因此其病死率較高。對(duì)于卵巢癌的治療方案在不斷改進(jìn)，腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)加上鉑類與紫杉醇聯(lián)合化療可改善卵巢癌患者療效,但總的5年生存率仍徘徊在30％-40%。因此研究卵巢癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制、尋找新的有效治療靶點(diǎn)，改善預(yù)后仍然是卵巢癌研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。自噬

2、，是繼凋亡后發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝的一條重要途徑，被稱作“II型程序性細(xì)胞死亡”，目前許多研究發(fā)現(xiàn)自噬調(diào)控機(jī)制的失活與多項(xiàng)器官組織腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
　　Atg5(自噬相關(guān)基因5)是自噬過程中發(fā)揮重要作用的基因，在自噬體的形成過程中，須要Atg5-Atg12-Atg16L結(jié)合系統(tǒng)和Atg8-PE結(jié)合系統(tǒng)兩個(gè)類泛素化蛋白質(zhì)系統(tǒng)介導(dǎo),Atg5與 Atg12形成的共價(jià)復(fù)合物，定位于自噬體膜表面利于自噬體膜的伸張，促進(jìn)自噬體的形成，是

3、自噬體形成所必須的重要因素。Beclinl(BECNI)是一種與自噬有關(guān)的抑癌基因,有研究提示BECNI的等位基因的缺失導(dǎo)致自噬活性減弱從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。目前研究顯示 Beclin1基因編碼的蛋白與Ⅲ型 PI3K(磷脂-3-羥激酶)形成一個(gè)復(fù)合體，調(diào)控Atg1、Atg3等其他Atg蛋白定位于自噬前體結(jié)構(gòu)中,因而能夠調(diào)控自噬的活性。基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因之一,可以分為野生型P53(wild type P53)和突變型P

4、53(mutant type P53)兩種類型，WP53蛋白非常不穩(wěn)定半衰期很短（20-60 min），而且含量極低,因此我們平常所采用的免疫組化方法檢測到的P53為突變型P53，是基因突變的產(chǎn)物。野生型P53通過編碼轉(zhuǎn)錄因子蛋白、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡及促進(jìn)細(xì)胞分化成熟達(dá)到抑制腫瘤的作用。突變型P53除了干擾野生型P53的抑癌作用外，還與其他致癌基因相互作用促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　本研究采用免疫組織化學(xué)及RT-PCR技術(shù)檢測A

5、tg5、Beclin1及P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中的表達(dá)情況，分析其與卵巢癌患者臨床病理因素的關(guān)系及三者表達(dá)的相關(guān)性,探討三者在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用,為更深一步了解卵巢癌發(fā)生進(jìn)展的分子機(jī)制、判斷卵巢癌患者預(yù)后情況提供理論支持，更為指導(dǎo)臨床治療提供新的思路。
　　目的:檢測自噬相關(guān)基因Atg5、Beclin1與P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織的表達(dá)情況，探討其與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的

6、相關(guān)性及意義，為研究卵巢癌的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的方向。
　　材料及方法:
　　1.研究對(duì)象：收集鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院和鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年9月-2015年6月住院因各種原因行手術(shù)切除卵巢的84例標(biāo)本，將其分為三組：惡性組：上皮性卵巢癌標(biāo)本34例（漿液性卵巢癌18例、粘液性卵巢癌10例、其它類型卵巢癌6例）；年齡22-78歲，平均年齡51歲；按國際婦產(chǎn)科（FIGO2000）臨床分期及病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：I期5例；II期9

7、例；III期9例；IV期11例；病理學(xué)分級(jí)：G19例；G211例；G314例；有淋巴轉(zhuǎn)移18例、無淋巴轉(zhuǎn)移16例。良性組：良性卵巢腫瘤組織25例。正常組：正常卵巢組織25例，正常卵巢組織取自因乳腺癌去勢手術(shù)、子宮肌瘤、卵巢非瘤樣囊腫等疾病行子宮及單/雙附件切除者的卵巢。標(biāo)本均取自第一次手術(shù)，經(jīng)兩位以上病理學(xué)老師雙盲證實(shí)，術(shù)前都沒有接受放療、化療。
　　2.研究方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法和RT-PCR（實(shí)時(shí)定量-多聚集鏈反應(yīng)半定量

8、法 Realtime-polymerase chain reaction）技術(shù)檢測25例正常卵巢組織、25例良性卵巢腫瘤組織及34例上皮性卵巢癌組織中Atg5、Beclin-1及P53蛋白和mRNA的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理因素進(jìn)行分析。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。計(jì)量資料用-x±S表示，惡性組、良性組、正常組 Atg5、Beclin1、P53 mRNA表達(dá)的定量比較采用單因素方差分析，兩兩比較

9、采用LSD-t檢驗(yàn)；免疫組織化學(xué)結(jié)果的定性資料分析采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用pearson列聯(lián)相關(guān)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。組間兩兩比較：檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=α/比較次數(shù)=0.0167。
　　結(jié)果:
　　1.Atg5在惡性組、良性組及正常組的mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.256、0.514、0.613；Atg5蛋白在惡性組、良性組及正常組的陽性表達(dá)率分別為：20.6%（7/34）、60%（15/25）、88%(22/25)。At

10、g5的mRNA及蛋白陽性表達(dá)率從正常組、良性組、惡性組表達(dá)依次降低，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.Beclin1在惡性組、良性組及正常組的mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.234、0.536、0.624；Beclin1蛋白在惡性組、良性組及正常組的陽性表達(dá)率分別為：26%（9/34）、60%（15/25）、92%(23/25)。Beclin1的mRNA及蛋白陽性表達(dá)率從正常組、良性組、惡性組表達(dá)依次降低，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、
　　3.P53在惡性組、良性組及正常組的mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.843、0.252、0.236；P53蛋白在惡性組、良性組及正常組陽性表達(dá)率分別為：76%（26/34）、12%（3/25）、4%(1/25)。P53的mRNA及蛋白陽性表達(dá)率在惡性組中表達(dá)高于良性組和正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其在良性組及正常組的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.在上皮性卵巢癌組織中，Atg5、Beclin1及P53的蛋白表達(dá)與患者臨

12、床及病理分期有關(guān)，隨著臨床與病理分期的進(jìn)展，Atg5、Beclin1蛋白表達(dá)越低，P53蛋白表達(dá)越高，而與患者年齡、病理類型及淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)。
　　5.在上皮性卵巢癌組織中，Atg5與Beclin1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān),P53的蛋白表達(dá)與 Atg5、Beclin1的蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.Beclinl和Atg5在上皮性卵巢癌組織中低表達(dá)、P53在上皮性卵巢癌組織中高表達(dá)，參與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程。