二氯甲烷降解菌的分離鑒定、微生物菌劑及基因文庫的構(gòu)建研究.pdf

1、本研究探討二氯甲烷的微生物降解。從長期被鹵代脂肪烴污染的曝氣池中獲得活性污泥，首先在對活性污泥進(jìn)行定向馴化后，在特定的載體上進(jìn)行了發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)，制備了二氯甲烷生物處理復(fù)合微生物菌劑。實(shí)驗(yàn)制備得到復(fù)合微生物菌劑成品，可方便投加使用。通過對pH、烘干溫度、載體比例的考察，利用正交試驗(yàn)，確定了復(fù)合微生物菌劑制備的最佳工藝，其最佳pH為7；最佳烘干溫度為35℃；最佳載體比例（麥麩：纖維素：穩(wěn)定劑）為85％：10％：5％。在二氯甲烷濃度為800

2、mg/L的水溶液中，經(jīng)過168h后可降解25.81％。制備的菌劑具有較好的穩(wěn)定性，可在常溫下穩(wěn)定保存30 d的時(shí)間，4℃下可保存60 d甚至更長的時(shí)間而仍保持對二氯甲烷的去除效率。
　　 從定向馴化的活性污泥中，分離篩選得到1株二氯甲烷降解菌株，通過菌株形態(tài)學(xué)觀察、生理生化測試、16S rDNA序列同源性以及Biolog綜合分析，確定為梭形芽孢桿菌（Lysinibacillus fusiformis），查閱相關(guān)文獻(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)該菌株

3、具有降解二氯甲烷的報(bào)道，因此，可將該菌株視為二氯甲烷生物降解的新菌株，命名為WH22。當(dāng)處于二氯甲烷濃度為800 mg/L體系中，WH22經(jīng)過168 h，降解率為22.7％。
　　 對篩選得到的菌株WH22進(jìn)行60Coγ射線和紫外線復(fù)合誘變育種，選育得到3株正突變株zt-4，Zt-5，zt-10，在相同條件下，二氯甲烷的降解率分別達(dá)到了66.2％，52.9％，52.1％，較之原始出發(fā)菌株，分別提高了191.63％，133.04％

4、，129.52％。以pH、溫度和無機(jī)氮源為考察因素，通過正交實(shí)驗(yàn)考察了正突變株的最佳降解工藝，得到其最佳的降解條件為pH7.0，溫度30℃，無機(jī)氮源（NH4）2SO4。同時(shí)，經(jīng)過傳代實(shí)驗(yàn)，zt-10的正突變株的遺傳穩(wěn)定性最好，而對于代號為zt-4和zt-5的正突變株，定期篩選和復(fù)壯是必要的。
　　 對降解菌株WH22進(jìn)行基因文庫的構(gòu)建，提取得到了符合構(gòu)庫要求的基因組DNA，有較高的純度與濃度，呈典型的核酸吸收特征。通過梯度濃度酶