玉米非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白的克隆、表達(dá)及鈣調(diào)素結(jié)合活性研究.pdf

1、本研究室曾從白菜中分離了一種新的鈣調(diào)素結(jié)合蛋白，CaMBP-10，它與CaM 的結(jié)合具有不依賴于 Ca<'2+>的特性，即在有Ca<'2+>和無Ca<'2+>條件下均能與CaM 結(jié)合。由于該蛋白與植物轉(zhuǎn)脂蛋白家族成員同源性非常高，且其理化性質(zhì)和生物學(xué)活性也與植物轉(zhuǎn)脂蛋白非常類似，故我們確認(rèn)其是植物非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白家族(nsLTPs)的新成員．近期研究證明，擬南芥nsLTP也與CaMBP-10具有相同的CaM結(jié)合性質(zhì)，這說明植物轉(zhuǎn)脂蛋白可

2、能是一種新的CaMBP，為證明CaM參與植物轉(zhuǎn)脂蛋白功能的調(diào)節(jié)提供了直接證據(jù)。 為進一步證明 nsLTP與CaM結(jié)合的普遍性，揭示二者相互作用的機制，本文從提取植物總RNA開始，克隆并表達(dá)了單子葉植物玉米的非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白(Zm-nsLTP)。CaM 凝膠覆蓋(CaM-gel overlay)分析和CaM-Sepharose下拉(pull-down)實驗結(jié)果表明 Zm-nsLTP 不僅具有CaM結(jié)合活性，且其不依賴于Ca2+的

3、CaM 結(jié)合特性與CaMBP-10和擬南芥非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白(At-nsLTP1) 也完全相同。用基因刪除和缺失突變的方法研究玉米非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白與CaM結(jié)合的結(jié)構(gòu)域(CaM-binding domain，CaMBD)，結(jié)果表明Zm-nsLTP 的 CaMBD 為 47～60 位氨基酸序列。蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，該序列為BAA結(jié)構(gòu)，與已發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)CaMBP的CaMBD的特征一致。為證明植物轉(zhuǎn)脂蛋白是一類新的CaMBP提供了又一證據(jù)。同