產(chǎn)D-氨基?；妇甑倪x育.pdf

1、D-氨基酸作為醫(yī)藥、農(nóng)藥、食品添加劑等的組成部分,已越來越得到人們的重視,D-氨基酸的開發(fā)利用已經(jīng)成為氨基酸產(chǎn)業(yè)的一個新熱點.采用化學合成結合手性拆分的方法制備D-氨基酸,具有低成本、適于大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點.而高效、綠色、安全的氨基?；阜ú鸱?是拆分氨基酸的最佳方法之一. D-氨基酰化酶(EC.3.5.1.81,N.D-AAase)能專一性地水解N-?；?D-氨基酸,得到高對映體過量值的D-氨基酸.因此,高活力和高立體選擇性的D-氨基酰

2、化酶的生產(chǎn)菌株的選育和產(chǎn)酶條件的優(yōu)化,是高效、低成本制備D-氨基酸的基礎. 本工作以N-乙酰-D-蛋氨酸(N-Acetyl-D-methionine)作為分離平板中的唯一碳氮源,從土樣中篩選產(chǎn)D-氨基?；傅奈⑸锞?得到一株酶活力和立體選擇性均較高的菌株B＇3.同時分析了酶催化體系溫度、pH值等因素對D-氨基酰化酶活力的影響.實驗結果表明最佳工藝為:溫度37℃,轉化體系pH值7.8,菌齡36h左右.D-氨基?；冈谧钸m轉化條

3、件下酶活可以達到15U/ml. 以菌株B＇3出發(fā)菌株,采用紫外線和NTG復合誘變方法,獲得高D-氨基?；富盍Φ耐蛔兙?酶活達到30U/ml.通過單因素實驗對突變菌株的培養(yǎng)條件進行優(yōu)化.在單因素實驗的基礎上,進行正交實驗.當胰蛋白胨的濃度為2.5﹪,N-Ac-D,L-Leu的濃度1.6﹪,K<'+>濃度為0.223﹪,Mg<'2+>濃度為0.16﹪時酶活最高,達到74U/ml. 通過對粗酶水解N-乙酰-D-蛋基酸條件的