生淀粉糖化酶菌株SDE的選育、產酶條件及酶學性質初步研究.pdf

1、糖化酶，全稱葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase EC.3.2.1.3)，又稱淀粉葡萄糖酶，功能在于從淀粉、糊精或糖原等碳水化合物的非還原性末端釋放β-D-葡萄糖，被廣泛地應用于食品、醫(yī)藥、發(fā)酵等工業(yè)，具有很高的商業(yè)價值，是我國產量最大的酶制劑產品之一。一般的糖化酶只能作用于糊化和液化后的淀粉。生淀粉糖化酶是指對不經過蒸煮糊化的生淀粉顆粒具有水解活性產生葡萄糖的酶類，簡化了傳統(tǒng)淀粉水解工藝中的糊化、液化和糖化步驟，具有良好的節(jié)能前景。

2、因此，分離和篩選生淀粉糖化酶菌株受到廣大研究者的高度重視。 本文從淀粉制品廠周圍土壤中分離到一株高產生淀粉糖化酶的菌株SDE，經形態(tài)、生理生化及16S rDNA序列分析將其鑒定為Cellulosimicrobium sp.。 SDE菌株的最適生長溫度和pH分別為30℃和pH7.0。在供試的幾種碳源中，SDE對半乳糖利用最好；以有機氮為氮源時生長較好，在供試的幾種無機氮源中，SDE對NH4NO3利用最好；該菌株除對慶大霉

3、素、卡那霉素有抗性外，對氨芐青霉素、紅霉素、青霉素、鏈霉素、氯霉素、利福平和四環(huán)素均敏感。 該酶以生玉米淀粉為底物時，最適作用pH6.0，最適作用溫度40℃；SDE菌株產生的生淀粉糖化酶在50℃以上熱穩(wěn)定性較差；但Ca2+可提高粗酶液的熱穩(wěn)定性，在Ca2+存在下80℃處理一個小時后，酶活仍保持在50％以上；但粗酶液的酸堿穩(wěn)定性不好，只有在pH6.0-7.0酶能保持較高的活力。Ca2+、Zn2+對酶有激活作用；但Ba2+、Cu2+

4、的存在對酶有抑制作用。生淀粉糖化酶為胞外酶和誘導酶。 以SDE為出發(fā)菌株，通過HNO2誘變處理，獲得了一株突變株SDE-28，其產酶能力由176.5U/mL提高到288U/mL。突變株SDE-28再經過紫外誘變，經篩選后獲得了一株穩(wěn)定性較好的生淀粉糖化酶高產菌株SDE-28-10，酶活達到了409U/mL。與出發(fā)菌株SDE相比，SDE-28-10突變株產酶活力提高了1.32倍。 通過碳氮源的正交實驗優(yōu)化了SDE-28-1