肌紅蛋白降解及肌原纖維小片化指數(shù)與人體死亡時(shí)間的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探索肌紅蛋白降解及肌原纖維小片化指數(shù)與人體死亡時(shí)間的相關(guān)性，摸索其中的規(guī)律及其用于實(shí)踐的可行性，為法醫(yī)學(xué)推斷死亡時(shí)間提供新方法。 方法： 利用免疫組織化學(xué)方法、蛋白免疫印跡法(Western BloWing)觀測(cè)人體骨骼肌中肌紅蛋白(Myoglobin，Mb)的降解與死亡時(shí)間的相關(guān)性；利用肌原纖維小片化指數(shù)(Myofibill Fragmentation Index，MFI)，觀測(cè)蛋白質(zhì)降解同死亡時(shí)間的相關(guān)性。

2、 遵循知情同意原則，取6例人體骨骼肌組織，置于室溫25±1℃；分別在死后0h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、72h取上述肌組織各0.5g。 實(shí)驗(yàn)一：運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法，觀測(cè)人體死后，骨骼肌中肌紅蛋白降解情況。將上述骨骼肌按常規(guī)制作石蠟切片，后用小鼠抗人Mb單克隆抗體作為一抗，用HRP標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體作為二抗，采用免疫組織化學(xué)染色，利用圖像分析技術(shù)測(cè)定平均光密度值，探討其與死亡時(shí)間的相關(guān)性，并

3、作統(tǒng)計(jì)分析和計(jì)算回歸方程。 實(shí)驗(yàn)二：運(yùn)用Western BloWing 技術(shù)研究人體死后，骨骼肌中肌紅蛋白降解情況。將上述骨骼肌組織經(jīng)勻漿、梯度離心、蛋白定量等步驟，制作蛋白樣品液，隨后用Western Blotting方法檢測(cè)肌紅蛋白，用發(fā)光法顯示，以β-actin 做為內(nèi)標(biāo)參照，并用圖像分析系統(tǒng)拍攝并測(cè)量其灰度值，計(jì)算兩者之間的比值，探討其與死亡時(shí)間的相關(guān)性，并作統(tǒng)計(jì)分析和計(jì)算回歸方程。 實(shí)驗(yàn)三：運(yùn)用肌原纖維小片化指

4、數(shù)推斷人體死亡時(shí)間。將上述肌組織經(jīng)勻漿、梯度離心、蛋白定量等步驟，制作蛋白樣品液，分光光度計(jì)在540nm處測(cè)其吸光度，以吸光度值×200作為肌原纖維小片化指數(shù)，探討其與死亡時(shí)間的相關(guān)性，并作統(tǒng)計(jì)分析和計(jì)算回歸方程。 結(jié)果： 1、死后12小時(shí)內(nèi)，骨骼肌細(xì)胞內(nèi) Mb 的染色顆粒整體變淡，數(shù)量在減少；死后24小時(shí)，Mb 的染色顆粒分布不均；死后48小時(shí)，出現(xiàn)大面積的脫色區(qū)。 2、隨著死亡時(shí)間的延長蛋白電泳條帶Myogl

5、obin/β-actin 的灰度值比值逐漸降低，以死后12小時(shí)內(nèi)下降較明顯，同免疫組織化學(xué)的結(jié)果相一致。 3、肌原纖維小片化指數(shù)隨死亡時(shí)間的延長而逐漸上升，死亡12小時(shí)內(nèi)變化較明顯，而后趨于平緩，呈一定的線性相關(guān)。 結(jié)論： 機(jī)體死亡后，體內(nèi)蛋白質(zhì)逐漸降解，肌原纖維不斷斷裂分解，其改變隨死亡時(shí)間的推移，呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。肌原纖維小片化指數(shù)隨著死亡時(shí)間的延長而逐步上升，且在死亡12小時(shí)內(nèi)變化較明顯，該方法操作簡單易行