基于血漿代謝組學的“冬病夏治”穴位貼敷法治療緩解期慢性支氣管炎的臨床療效及機制研究.pdf

1、慢性支氣管炎是由感染、過敏等因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥，臨床以咳嗽、咳痰或伴喘息為主要特征，是臨床常見的一種呼吸系統(tǒng)疾病。近年來，伴隨人口老齡化進程和環(huán)境污染的加劇，我國慢性支氣管炎患病人數(shù)日趨增多。本病具有典型的病程長、易復發(fā)等特征，伴隨疾病的進展可并發(fā)阻塞性肺氣腫、肺動脈高壓、肺源性心臟病等，嚴重危害人類健康，甚至影響患者的勞動能力和生存質量。當前，慢性阻塞性肺疾病已居世界死亡原因第四位，且發(fā)病率仍呈上

2、升趨勢。因此，對慢性支氣管炎的有效防治具有非常重要的社會意義。“冬病夏治”穴位貼敷療法防治慢性支氣管炎以其療效明顯、操作簡便、副作用小等優(yōu)勢越來越被患者接受和認可。諸多學者對中藥穴位貼敷療法的機制進行了初步研究，一般認為是藥物的透皮吸收與經(jīng)絡系統(tǒng)對人體調(diào)節(jié)的雙重效應。但目前中藥的藥效成分及經(jīng)絡調(diào)節(jié)機制尚未清楚，尋找其它途徑的研究方法對于揭示穴位貼敷療法的機制意義重大。故本研究首先通過觀察“冬病夏治”穴位貼敷治療前后慢性支氣管炎患者發(fā)作時

3、主要癥狀單項積分、生存質量等指標的變化，明確“冬病夏治”穴位貼敷法治療慢性支氣管炎的臨床療效；其次，通過觀察免疫球蛋白、炎癥細胞因子、神經(jīng)遞質的變化，一方面佐證穴位貼敷法治療慢支的療效，另一方面從神經(jīng)-炎癥-免疫的角度，綜合解釋“冬病夏治”穴位貼敷法治療慢支的作用機制；第三，利用基于液相-質譜聯(lián)用（LC/MS）技術的代謝組學研究方法，將代謝組學技術應用到“冬病夏治”穴位貼敷療法的整體療效評價以及作用機制研究，分析穴位貼敷治療前后患者的血

4、漿代謝圖譜，并通過觀察治療所引起的內(nèi)源性代謝物的變化，推測體內(nèi)生化狀態(tài)的變化，進而探討該療法的作用機制；尋找反映治療前后機體變化的代謝標志物，利用代謝物的終端性信息，為尋找或闡明藥物作用的靶點或受體奠定前期基礎。
　　本論文的研究內(nèi)容主要包括以下三個部分：
　　第一部分“冬病夏治”穴位貼敷法治療緩解期慢性支氣管炎的臨床療效觀察
　　目的：觀察“冬病夏治”穴位貼敷法治療緩解期慢性支氣管炎患者的臨床療效。
　　方法：

5、選擇符合納入標準的緩解期慢性支氣管炎患者50例作為慢支組，分別于頭伏、二伏、末伏的第一天給予穴位貼敷治療，共3次。30天為1個療程。采取樣本治療前后自身對照的方法進行對比分析。將患者治療前1年（2013年7月～2014年6月）的癥狀，與治療后1年（2014年7月～2015年6月）的癥狀做比較。參照《中藥新藥臨床研究指導原則》對慢支癥狀分級量化表評分，記錄治療前后觀察期內(nèi)咳嗽、咳痰、咳喘等各單項癥狀的嚴重程度及持續(xù)時間（以天數(shù)為記錄單位）

6、，并評定療效；采用圣喬治醫(yī)院呼吸問卷（SGRQ），從癥狀的頻率和嚴重程度（癥狀部分）、會造成氣促或受疾病限制的活動（活動部分）以及疾病導致的社會能力損害和心理問題（對日常生活的影響）三個方面綜合評價穴位貼敷治療前后慢支患者的生存質量。
　　結果：“冬病夏治”穴位貼敷法可顯著改善慢支患者臨床癥狀：治療后1年患者咳嗽癥狀積分明顯低于治療前（P<0.05）；咳痰癥狀積分與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；咳喘癥狀積分較治療前明

7、顯降低（P<0.05）；臨床中醫(yī)證候療效明顯，總有效率72％；該療法可明顯改善慢支患者的生存質量，治療后1年癥狀部分評分、活動部分評分、影響部分評分及 SGRQ總評分較治療前均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　第二部分“冬病夏治”穴位貼敷法對緩解期慢性支氣管炎患者神經(jīng)-炎癥-免疫系統(tǒng)調(diào)控影響的研究
　　目的：通過免疫球蛋白、炎癥細胞因子、神經(jīng)遞質的觀察，在明確“冬病夏治”穴位貼敷療法治療慢支療效的基礎上，探討

8、該療法的作用機制，從神經(jīng)-炎癥-免疫整體的角度探討其作用靶點和作用途徑。
　　方法：選擇符合納入標準的緩解期慢性支氣管炎患者50例，設為慢支組（chronic bronchitis, CB）。給予“三伏天”穴位貼敷治療，30天作為一個療程。同時設50例健康志愿者作為對照組（control）。檢測對照組以及慢支病人治療前（pre-treatment, Pre）、治療后（post-treatment, Post）、治療后冬季（wint

9、er）血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgE），炎癥細胞因子（TNF-α、IL-4、IL-8、IL-10），血漿P物質(SP)，血管活性腸肽（VIP）等指標。比較慢支組治療后、治療后冬季免疫球蛋白、炎癥細胞因子以及神經(jīng)遞質與治療前的差異，并將慢支組治療前、治療后、治療后冬季的相應指標與對照組進行比較，從神經(jīng)-炎癥-免疫角度，探討“冬病夏治”穴位貼敷療法對慢支患者炎癥的改善以及對機體的保護機制。
　　結果：與對照組比較，慢支

10、組治療前、治療后以及治療后冬季IgA、IgG、IgM、IL-10、VIP水平下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；IgE、IL-4、IL-8、TNF-α、SP水平升高，除慢支組治療后IL-8之外，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；慢支組治療后IgA、IgG、IgM、IL-10、VIP水平較治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；IgE、IL-4、IL-8、SP水平較治療前下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；治療

11、后TNF-α較治療前有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。慢支組治療后冬季IgA、IgG、IgM、IL-10、VIP水平較治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；IgE、IL-4、IL-8、SP水平較治療前下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；治療后冬季TNF-α較治療前有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與慢支組治療后比較，治療后冬季 IgM、IL-10、VIP水平下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；

12、IL-8、SP水平升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；治療后冬季IgA、IgG、TNF-α水平有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；IgE、IL-4水平有上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　第三部分基于血漿代謝組學的“冬病夏治”穴位貼敷法治療緩解期慢性支氣管炎的機制研究
　　目的：基于現(xiàn)代生物質譜技術，運用代謝組學方法研究“冬病夏治”穴位貼敷治療前后慢支患者的血漿代謝組學特征，通過治療前后潛在生

13、物標志物變化，探討“冬病夏治”穴位貼敷療法防治慢支的機理，并利用代謝物的終端性信息，為尋找或闡明藥物作用的靶點或受體奠定前期基礎。
　　方法：選擇符合納入標準的緩解期慢支患者50例，設為慢支組，給予“三伏天”穴位貼敷療法，30天作為一個療程。同時設50例健康志愿者作為對照組（control）。分別采集對照組及慢支組治療前（Pre）、治療后（Post）、治療后冬季（winter）血液樣品，并采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀（HPLC-M

14、S）進行檢測。利用主成分分析法（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理，比較各組血漿代謝組學原始圖譜和數(shù)據(jù)。
　　結果：各組血漿代謝物圖譜均呈現(xiàn)聚類型分布，慢支組在治療前與對照組的代謝譜存在明顯不同。穴位貼敷治療后，慢支組治療后以及治

15、療后冬季的代謝譜均向對照組回歸，與對照組代謝成分接近。初步推測膽堿、組氨酸、維生素 B6、甲硫氨酸、生物喋呤等為慢支治療前區(qū)分對照組的潛在標志物，在發(fā)病和復發(fā)中發(fā)揮重要作用。其中，組氨酸、甲硫氨酸在各組比較中均發(fā)揮重要作用，且呈現(xiàn)治療后組氨酸降低、甲硫氨酸升高的趨勢。
　　結論：
　　1“冬病夏治”穴位貼敷法治療緩解期慢性支氣管炎療效確切，值得在臨床繼續(xù)深化和推廣。該觀察結果也為深入研究“冬病夏治”穴位貼敷療法的作用機制提供

16、了堅實的臨床數(shù)據(jù)支持。
　　2“冬病夏治”穴位貼敷法能改善機體的免疫狀態(tài)，協(xié)調(diào)免疫平衡，增強機體防病抗病能力；能調(diào)節(jié)炎癥細胞因子的釋放，降低炎癥發(fā)生的程度；能通過神經(jīng)遞質的調(diào)節(jié)，對免疫和炎癥反應發(fā)揮良性調(diào)節(jié)作用。這可能是其預防慢支復發(fā)、減輕癥狀的協(xié)同機制。
　　3通過對人體血漿的代謝組學研究，發(fā)現(xiàn)慢支患者存在與對照組明顯不同的代謝圖譜。慢支組治療后及治療后冬季代謝圖譜向對照組的回歸，證實了“冬病夏治”穴位貼敷法治療慢支的療效