基于代謝組學的冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘作用機制及臨床療效研究.pdf

1、冬病夏治是中醫(yī)防治疾病的特色療法，其理論根源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》。冬病夏治理論體現(xiàn)了中醫(yī)“天人相應”的整體觀、“不治已病治未病”的疾病預防觀、“春夏養(yǎng)陽，秋冬養(yǎng)陰”的陰陽平衡觀、經(jīng)絡養(yǎng)生觀及五行生克制化，在該理論指導下衍生了多種具體治療方法，其中“三伏貼”是最能體現(xiàn)冬病夏治理念的療法。冬病夏治穴位貼敷療法被應用于多種疾病的防治，尤其是對肺系疾病的預防和治療上取得了良好療效。
　　支氣管哮喘(bronchial asthma)簡稱哮喘，是

2、由多種細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病，是一種以氣道高反應性和可逆性氣道阻塞為特征的免疫變態(tài)反應性疾病。目前全球約有3億哮喘患者，其中每年約有1500萬人因該病喪失勞動能力，中國已有2000萬的哮喘患者，且哮喘的患病率呈持續(xù)升高的趨勢，給患者和社會帶來了沉重的負擔，因此哮喘被認為是現(xiàn)階段對公眾健康具有重大威脅的慢性肺部疾病。西醫(yī)在哮喘急性發(fā)作期的治療上有明顯優(yōu)勢，但對于非急性發(fā)作期的防治尚不令人滿意。冬病夏治穴位貼敷療法以其療效顯

3、著，治療費用低，無明顯不良反應，且能有效防止其復發(fā)等優(yōu)勢，被廣大哮喘患者所接受。但是其作用機制不明確且相關研究較少，難以從整體層面闡述其作用機理，對其進一步深入的探討研究有賴于適合闡釋中醫(yī)理論的技術平臺，而代謝組學技術則提供了很好的切入點。
　　代謝組學(metabolomics)是繼基因組學、蛋白質組學和轉錄組學之后興起的系統(tǒng)生物學的新分支。它通過考察生物體系受刺激或擾動前后代謝產(chǎn)物圖譜及其動態(tài)變化來研究生物體系的代謝網(wǎng)絡。它跳

4、過了生命體內(nèi)復雜的調(diào)控過程，通過對代謝物的分析給出最終的、整體的結果，這種在整體上展示生物體內(nèi)在的動態(tài)變化狀況的技術，避免了以往采用單一或少數(shù)幾個指標研究某種生理和病理變化的弊端，故而在方法學上具有融整體、動態(tài)、綜合、分析于一體的特點，符合中醫(yī)學整體恒動觀念，是一項比較適合中醫(yī)學研究的技術手段。
　　課題組借助代謝組學技術，通過對肺氣虛型哮喘患者經(jīng)冬病夏治穴位貼敷干預前后及干預后冬季代謝物的分析，確定肺氣虛型哮喘患者的“代謝組學特

5、征”的小分子生物標志物及冬病夏治穴位貼敷發(fā)揮療效的內(nèi)源性物質基礎，以小分子生物標志物為線索探討冬病夏治穴位貼敷療法防治哮喘的作用機制。并討論冬病夏治穴位貼敷對哮喘患者免疫、炎癥、神經(jīng)調(diào)控機制的影響，以期從較為“宏觀”層面探討作用機制的同時反證其臨床療效。通過上述研究將為精準醫(yī)學、提高臨床療效奠定堅實的實驗基礎。
　　本篇論文主要包括理論、臨床和實驗三大部分。
　　第一部分冬病夏治理論研究概述
　　目的：研究冬病夏治理論

6、內(nèi)涵并總結其臨床應用及治療哮喘的作用機理，探討利用新技術平臺對冬病夏治防治哮喘的機制進行深入、全面探索的可行性。
　　方法：根據(jù)古今文獻記載，從冬病夏治理論淵源、防治肺系疾病的臨床應用、防治哮喘的作用機制研究及新研究方法等角度進行了詳細論述。
　　結果：冬病夏治有豐富的理論內(nèi)涵，其防治疾病的方法被廣泛應用于臨床實踐，并取得良好療效。但發(fā)揮療效的作用機理尚不明確，需要適合闡述中醫(yī)理論的研究方法進一步深入探討。
　　第二部

7、分冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘臨床療效觀察
　　目的：觀察冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的臨床療效。
　　方法：采用自身配對比較方法，選擇符合診斷標準的哮喘患者50例，給予冬病夏治穴位貼敷治療。詳細記錄患者治療前后癥狀積分、發(fā)作次數(shù)，并對其生活質量進行評分比較。
　　結果：與治療前比較，治療后哮喘患者臨床癥狀評分均明顯降低、發(fā)病次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),總有效率為86％；治療后哮喘患者哮喘癥狀、活動

8、受限、心理功能狀況及對自我健康的關心等四個維度評分均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；對刺激原的反應評分雖有所提高，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　第三部分冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制的實驗研究
　　實驗一肺氣虛型支氣管哮喘患者血漿代謝組學特征研究
　　目的：應用代謝組學技術研究肺氣虛型支氣管哮喘患者的血漿代謝組學特征，尋找肺氣虛型哮喘的潛在生物標志物。
　　方法：選擇符合診

9、斷標準的哮喘患者50例，設為疾病組；并選擇50例健康志愿者，設為正常組。分別對正常組及疾病組采集血液。采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)檢測兩組的血漿代謝物，利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，比較兩組血漿代謝組學原始圖譜和數(shù)據(jù)，找尋潛在生物標志物。
　　結果：疾病組的代謝譜與正常組明顯不同，初步推測組胺、膽堿、半胱氨酸、同型半胱氨酸、鳥氨酸、谷氨酸、鋅、腎上腺素、

10、高肌肽等9種物質為肺氣虛型支氣管哮喘的潛在代謝標志物。其中組胺、膽堿、鳥氨酸、同型半胱氨酸在疾病組呈上升趨勢，其他5種物質均呈下降趨勢。
　　實驗二基于代謝組學探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制研究
　　目的：應用代謝組學探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制，找尋其發(fā)揮療效的潛在生物標志物。
　　方法：選擇符合診斷標準的哮喘患者50例，給予冬病夏治穴位貼敷治療。分別于治療前、治療后及治療后冬季采集血液

11、。采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)檢測三次血漿代謝物，利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，比較三次血漿代謝組學原始圖譜和數(shù)據(jù)，找尋潛在生物標志物。
　　結果：(1)哮喘患者治療后的代謝譜與治療前有明顯不同，初步推測組胺、膽堿、半胱氨酸、同型半胱氨酸、鋅、鳥氨酸、腺嘌呤、乙酰乙酸、多巴胺等9種物質為區(qū)別哮喘患者治療前后差異性潛在代謝標志物。其中組胺、膽堿、鳥氨酸、同

12、型半胱氨酸、乙酰乙酸、腺嘌呤在治療后呈下降趨勢，其他3種物質均呈上升趨勢。(2)哮喘患者治療后冬季的代謝譜與治療前有明顯不同，初步推測出膽堿、半胱氨酸、鋅、鳥氨酸、腎上腺素、高肌肽、同型半胱氨酸、脫氫抗壞血酸、乙酰膽堿等9種物質為區(qū)別哮喘患者治療前與治療后冬季差異性潛在代謝標志物。其中膽堿、鳥氨酸、同型半胱氨酸、乙酰膽堿在治療后冬季呈下降趨勢，其他5種物質均呈上升趨勢。
　　實驗三冬病夏治穴位貼敷對支氣管哮喘患者免疫、炎癥及神經(jīng)調(diào)

13、控機制的影響
　　目的：從免疫、炎癥及神經(jīng)調(diào)控機制探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機理。
　　方法：選擇符合診斷標準的哮喘患者50例，設為疾病組，給予冬病夏治穴位貼敷治療；并選擇50例健康志愿者，設為正常組。檢測正常組及疾病組哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清免疫球蛋白A、G、E(IgA、IgG、IgE)、干擾素-γ(IFN-γ)、白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TN

14、F-α)、血漿P物質(SP)及血管活性腸肽(VIP)的含量，比較正常組、疾病組治療前、治療后及治療后冬季檢測指標的差異。
　　結果：(1)免疫球蛋白：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清IgE含量均明顯升高，血清IgA、IgG含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血清IgE含量均明顯降低，血清IgA、IgG含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)細胞

15、因子：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清IFN-γ、IL-10含量均明顯降低，血清TNF-α含量升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而 IL-4含量在治療前和治療后冬季升高(P<0.05)，治療后與正常組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血清 IFN-γ、IL-10含量明顯升高，血清 IL-4含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而 TNF-α含量雖有降低，但

16、差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)神經(jīng)遞質：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血漿SP含量明顯升高，VIP含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血漿SP含量明顯降低，VIP含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1目前冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制研究較少，且集中于夏季治療時段某一功能的相關個別指標，難以全面而整體地闡釋

17、其機理。代謝組學技術所具備的優(yōu)勢和特點有利于進一步深入探討冬病夏治穴位貼敷防治哮喘的作用機制，為全面而整體地研究其作用機理提供了可能。
　　2冬病夏治穴位貼敷療法不僅能夠改善哮喘患者的臨床癥狀、減少發(fā)作次數(shù)，而且能夠提高患者生存質量，療效確切，為作用機制研究提供了堅實的臨床基礎。
　　3肺氣虛型支氣管哮喘患者內(nèi)源性物質變化可能與膽堿代謝、氨基酸代謝及能量代謝有關，還伴有激素、微量元素及細胞因子的異常變化；同時還可能存在抗氧化

18、應激及抗凋亡機制異常、維生素類的缺乏和氨轉運的異常。
　　4冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制可能與調(diào)節(jié)氨基酸代謝及能量代謝，增強免疫功能，提高機體抗氧化及抗凋亡能力，調(diào)控細胞信號及神經(jīng)遞質，改善氨轉運，調(diào)節(jié)激素水平有關。
　　5冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機制中夏季治療期以調(diào)控細胞信號和抑制變態(tài)反應為特有機制；冬季則以調(diào)節(jié)激素水平和增強抗氧化能力為特有機制。
　　6冬病夏治穴位貼敷可能通過調(diào)控細胞因子的