三株TMPD降解菌的鑒定.pdf

1、冰川棘豆(Oxytropis.glacialis)是瘋草的一種，主要生長(zhǎng)在西藏阿里地區(qū)，是對(duì)牧區(qū)危害最嚴(yán)重的毒草之一。2,2,6,6-四甲基哌啶酮(TMPD)是從冰川棘豆地上部分提取、分離出來(lái)的一種主要毒性生物堿。冰川棘豆雖為毒草，但其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高，如能去毒合理利用，變廢為寶，將會(huì)取得很好的經(jīng)濟(jì)效益。本研究基于前期應(yīng)用微生物降解冰川棘豆毒素的研究，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和生理生化特征測(cè)定，結(jié)合16S rDNA序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育的分析，確定3株

2、TMPD降解菌的種屬。 1 LF-1菌株的菌體呈桿狀，0.5～0.9×1.0～2.0μm，革蘭氏染色陰性，單個(gè)、成對(duì)和不規(guī)則堆狀存在，有莢膜，無(wú)芽孢，無(wú)運(yùn)動(dòng)性；菌落呈圓形，表面光滑，濕潤(rùn)，隆起，邊緣整齊，灰白色，半透明；葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兼性厭氧，產(chǎn)生吲哚，M.R.試驗(yàn)陽(yáng)性，V-P試驗(yàn)不穩(wěn)定，還原硝酸鹽，能利用檸檬酸鹽和丙二酸鹽，不產(chǎn)生H<,2>S，不液化明膠，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陰性，脲酶陽(yáng)性，三糖鐵上斜面和底層均為黃色，并產(chǎn)

3、氣，麥康凱平板上的菌落呈現(xiàn)粉紅色。通過(guò)16S rDNA序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析，LF-1菌株的遺傳進(jìn)化距離與克雷伯氏桿菌屬最近，它與產(chǎn)酸克雷伯氏桿菌(Klebsiella oxytoca)同處于一個(gè)最小的分支，與已知菌株Klebsiella oxytoca isolate DR.Y14(DQ226215)的同源性達(dá)到99.52％。綜合以上結(jié)果，鑒定LF-1菌株為產(chǎn)酸克雷伯氏桿菌(Klebsiellaoxytoca)。 2 LF-

4、2菌株的菌體為球狀，0.8～1.0μm，革蘭氏染色陽(yáng)性，單個(gè)、成對(duì)和不規(guī)則堆狀存在，無(wú)莢膜，無(wú)芽孢，無(wú)運(yùn)動(dòng)性；菌落呈圓形，表面光滑，濕潤(rùn)，隆起，邊緣整齊，灰白色，半透明；葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，兼性厭氧，不產(chǎn)生吲哚，M.R.試驗(yàn)陽(yáng)性，V-P試驗(yàn)陰性，水解淀粉，還原硝酸鹽，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陰性，脲酶陽(yáng)性，凝固酶陰性，在5％NaCl和7％NaCl中生長(zhǎng)。通過(guò)16S rDNA序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析，LF-2菌株的遺傳進(jìn)化距離與葡萄球菌屬最近

5、，與巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri)同處于一個(gè)最小的分支，與已知菌株Staphylococcus pasteuri(AJ717376)的同源性達(dá)到99.80％。綜合以上結(jié)果，鑒定LF-2菌株為巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri)。 3 LF-3菌株的菌體呈桿狀，1.0～1.2×1.5～5.0μm，革蘭氏染色陰性，單個(gè)、成對(duì)和不規(guī)則堆狀存在，無(wú)莢膜，有芽孢，芽孢橢圓形或柱形，

6、中生或偏中生，孢囊不膨大，有運(yùn)動(dòng)性；菌落呈菌絲體狀，直徑為0.5～4cm，表面不光滑，干燥，平升狀，表面有同心圓，邊緣不整齊，呈鋸齒狀，灰白色，半透明；葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)少量酸，厭氧條件下不生長(zhǎng)，不產(chǎn)生吲哚，M.R.試驗(yàn)陰性，V-P試驗(yàn)陰性，水解淀粉，不還原硝酸鹽，不能利用檸檬酸鹽和丙二酸鹽，不產(chǎn)生H<,2>S，液化明膠，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陰性，脲酶陰性，在5％NaCl和7％NaCl中生長(zhǎng)，50℃時(shí)不生長(zhǎng)。通過(guò)16S rDNA序列同源性及系統(tǒng)