大豆及蕓豆高效根瘤菌的分子標(biāo)記研究.pdf

1、本研究針對本室前期篩選到的高效大豆和蕓豆根瘤菌進(jìn)行分子標(biāo)記研究。 首先確定供試菌株的分類學(xué)地位。通過16SrDNA-RFLP、IGS-RFLP和16SrDNA全序列測定等方法最終將CCBAU01287歸為中華根瘤菌屬，其分類地位與費(fèi)氏根瘤菌最近；將CCBAU65121歸為根瘤菌屬，其分類地位與菜豆根瘤菌最近。 采用三親本雜交的方法，將綠色熒光蛋白基因(gfp)轉(zhuǎn)入高效、抗逆、廣適應(yīng)性的快生大豆根瘤菌CCBAU0128

2、7和菜豆根瘤菌CCBAU65121中；將發(fā)光酶基因(luxAB)轉(zhuǎn)入CCBAU01287中，獲得分別含gfp和luxAB基因的轉(zhuǎn)基因菌株CCBAU01287(G)、CCBAU65121(G)和CCBAU01287(L)。平板傳代和共生檢測表明：外源質(zhì)粒在宿主菌中均能夠自我復(fù)制，穩(wěn)定遺傳。通過對植株生物量的測定，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明綠色熒光蛋白基因(gfp)和發(fā)光酶基因(luxAB)標(biāo)記的菌株CCBAU01287(G)和CCBAU01287(

3、L)對大豆的生長及生物量的積累均與出發(fā)菌株的效果無顯著差異。兩個(gè)轉(zhuǎn)基因菌株為今后CCBAU01287和CCBAU65121菌劑的推廣提供了重要支持。 進(jìn)一步研究證明，gfp標(biāo)記菌CCBAU01287(G)可用于實(shí)時(shí)監(jiān)測根瘤菌在大豆根部的早期定殖情況和測定根瘤菌在根表的定殖密度；luxAB標(biāo)記菌CCBAU01287(L)可以用于檢測根瘤菌在土壤回接實(shí)驗(yàn)中的占瘤率。 為保證高效菌株在生產(chǎn)應(yīng)用中能夠具有較高的穩(wěn)定性，采用草