根瘤菌菌劑研究.pdf

1、選取豌豆根瘤菌三葉草生物型(Rhizobiumleguminosarumbv.trifolii)TA1和華癸中生根瘤菌(Mesorhizobiumhuakuii)7653R作為供試菌，測(cè)定了根瘤菌在YMA、BSE、TY、SM、PA和Alrarezmannitalmedium(AMM)等六種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的0D值曲線。結(jié)果表明：供試菌在YMA和BSE上生長(zhǎng)較快，在PA中幾乎不生長(zhǎng)，TAl在AMM中幾乎不生長(zhǎng)，但7653R在該配方中有明顯生長(zhǎng)

2、且快于SM。供試菌雖然在BSE中生長(zhǎng)速度最快，但配制BSE的步驟較為復(fù)雜，并需要大量豆芽，培養(yǎng)基的質(zhì)量常取決于豆芽的優(yōu)劣。相比之下YMA配制方便，質(zhì)量也易于控制，是工業(yè)生產(chǎn)根瘤菌劑的合適培養(yǎng)基。 本研究測(cè)定了供試菌在YMA中的生長(zhǎng)曲線和相應(yīng)的OD值曲線，并通過(guò)作圖比較了兩種曲線的相互關(guān)系。在YMA中生長(zhǎng)時(shí)，7653R的代時(shí)為6.6小時(shí)；TAl為2.9小時(shí)。在此基礎(chǔ)上制備了供試菌固體和濃縮液體菌劑，并比較測(cè)定了根瘤菌在供試菌劑中經(jīng)

3、不同保存時(shí)間之后的活菌數(shù)。 供試固體菌劑分別以草炭、蛭石和珍珠巖為載體，在測(cè)定載體相關(guān)物理化學(xué)性質(zhì)的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)載體進(jìn)行含水量和pH值的預(yù)處理，加入適量根瘤菌培養(yǎng)液之后制成固體菌劑。比較測(cè)定了根瘤菌在3種供試固體菌劑中于室溫下保藏的存活率，結(jié)果表明：在武漢3月到9月的測(cè)定時(shí)間內(nèi)，草炭菌劑的存活率最高、珍珠巖菌劑次之、蛭石菌劑最低。兩供試菌的活菌數(shù)一般在30天內(nèi)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，在以后五個(gè)月的存放中各供試固體菌劑的活菌數(shù)均逐漸回落。其

4、中7653R在草炭劑型中的最高活菌數(shù)可達(dá)37.0億/克，TAl在蛭石劑型中可達(dá)7.0億/克。供試菌在草炭劑型中的活菌數(shù)下降均較蛭石和珍珠巖劑型慢。 本研究還制備了濃縮液體菌劑，并測(cè)定了其在4℃冰箱中保存的活菌數(shù)。結(jié)果表明：雖然7653R比TAl有更高的起始菌數(shù)，但兩種供試菌在濃縮液體劑型中的活菌數(shù)均隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷減少，并在真空和N2中的保藏效果有明顯的差異：TAl在真空中保藏較好，而7653R在N2中較好。TAl在N2

5、中的活菌數(shù)下降較快，一個(gè)月后已降至起始菌數(shù)的l/l0左右。 為提高濃縮液體菌劑的保藏效果，本研究比較測(cè)定了苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸和對(duì)羥基苯甲酸乙脂等三種抑菌劑的最佳使用濃度。結(jié)果表明：三種供試抑菌劑均只在其最佳濃度時(shí)才對(duì)根瘤菌有最好的保藏效果，濃度偏高和偏低時(shí)效果下降，濃度更高時(shí)甚至有殺菌作用。其中苯甲酸鈉的最佳應(yīng)用濃度為30mg/L，對(duì)羥苯甲酸為5-7mg/L，對(duì)羥苯甲酸乙脂為2-5mg/L。另選取海藻糖作為保護(hù)劑，比較測(cè)定了