NDRG2在結(jié)腸癌細胞中的表達及其功能的初步研究.pdf

1、人NDRG2基因（N-myc downstream-regulated gene 2）是本課題組于2000年用消減雜交法從正常成人全腦cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)和獲得的新序列。其全長為2,024bp。NDRG2基因含有16個外顯子和15個內(nèi)含子，定位于染色體14q11.2，編碼一個含有357個氨基酸殘基、分子量約為40kDa的蛋白質(zhì)。已報道該家族共有四個成員：NDRG1、NDRG2、NDRG3和NDRG4，其中NDRG4又分為三個亞型：NDRG

2、4-B、NDRG4-Bvar和NDRG4-H。該家族各成員間的氨基酸殘基序列同源性很高，但在各組織間的表達水平有明顯差異。目前，人NDRG2的具體功能還不是很清楚，本課題組初步研究結(jié)果顯示，該基因在多種正常組織中高表達，而在某些腫瘤組織和腫瘤細胞系中低表達或無表達；NDRG2可誘導樹突狀細胞的分化，這些結(jié)果提示：NDRG2基因與腫瘤細胞分化、增殖密切相關(guān)。
　　為了深入研究NDRG2基因的功能，闡明其在體內(nèi)的作用機制，弄清具體的信

3、號傳導通路及其如何與其它分子相互作用。本實驗分兩個部分，第一部分，我們首先運用RealtimeRT-PCR和Western-blot法，檢測丁酸鈉誘導結(jié)腸癌細胞分化后NDRG2的差異表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著誘導時間的延長，NDRG2mRNA和蛋白水平逐漸升高，提示NDRG2與結(jié)腸癌細胞的分化密切相關(guān)，但是其機制還不是很清楚，需要進一步研究。
　　第二部分，用腺病毒介導NGRG2（Ad-NDRG2）轉(zhuǎn)染低表達NDRG2的人結(jié)腸癌細胞H

4、T-29，western blot及RT-PCR方法檢測外源性NDRG2基因的表達,借助MTT、流式細胞儀檢測對NDRG2轉(zhuǎn)染前后人結(jié)腸癌細胞HT-29的生物學行為進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NDRG2過表達后，明顯抑制結(jié)腸癌細胞的生長，提示NDRG2具有抑制腫瘤生長的功能。
　　結(jié)論：
　　1.結(jié)腸癌細胞系經(jīng)丁酸鈉誘導分化后NDRG2的表達隨著分化進程升高，說明NDRG2與結(jié)腸癌細胞的分化密切相關(guān)。
　　2.Ad-NDRG2轉(zhuǎn)