小鼠早期胚胎發(fā)育過程中細胞凋亡及凋亡基因表達的檢測.pdf

1、早期胚胎發(fā)育過程當(dāng)中伴隨著大量的發(fā)育異常的細胞，尤其在體外培養(yǎng)過程中更為普遍。細胞凋亡是體細胞中清除發(fā)育異常細胞的重要途徑之一，研究表明，早期胚胎當(dāng)中異常細胞的清除也是通過細胞凋亡的途徑實現(xiàn)的。著床前胚胎當(dāng)中凋亡現(xiàn)象普遍存在，即使是形態(tài)正常的胚胎當(dāng)中也存在凋亡細胞，而細胞凋亡的發(fā)生是凋亡基因的表達的直接結(jié)果。胚胎細胞大比率的凋亡對胚胎的生長是不利的，為了提高體外培養(yǎng)胚胎的存活能力，人們通過改變培養(yǎng)條件，添加生長因子來抑制胚胎細胞的凋亡。

2、 各種生長因子影響胚胎發(fā)育能力的研究已有大量的報道，但這些研究大多停留于各時期胚胎發(fā)育率的數(shù)據(jù)統(tǒng)計，而對各種生長因子對胚胎作用的分子機制沒有做進一步的深入研究。尤其對早期胚胎發(fā)育過程當(dāng)中生長因子與凋亡基因表達變化之間的關(guān)系研究的更少。對早期胚胎發(fā)育過程中凋亡基因表達變化的研究對于揭示早期胚胎發(fā)育機制有重要的意義。 本實驗采用彗星電泳、改進后的胚胎RNA提取方案結(jié)合巢式RT-PCR、免疫化學(xué)染色的方法，對小鼠體內(nèi)早期胚

3、胎在發(fā)育過程中的細胞凋亡情況及凋亡基因Bcl-2家族的表達情況進行了研究。同時檢測了IGF-1在體外培養(yǎng)條件下對小鼠胚胎細胞凋亡及凋亡基因Bcl-2家族(Bax、Bcl-2、Bak、Bcl-xl)表達的影響，初步揭示了IGF-1可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族基因的表達，抑制細胞凋亡的發(fā)生，提高了小鼠胚胎的質(zhì)量和胚胎的發(fā)育率。這對于揭示早期胚胎發(fā)育機制機理以及獲得更多的優(yōu)質(zhì)胚胎有重要的意義。 實驗結(jié)果表明： 1.在國內(nèi)同類

4、研究中率先使用彗星電泳的方法檢測早期胚胎當(dāng)中的凋亡現(xiàn)象。彗星電泳結(jié)果表明早期胚胎發(fā)育過程中廣泛存在凋亡，不同發(fā)育時期的形態(tài)正常的胚胎當(dāng)中存在凋亡細胞。 2.采用改進的胚胎細胞總RNA提取方案，應(yīng)用少量胚胎提取總RNA，使用巢式PCR的方法檢測到Bcl-2家族當(dāng)中4個基因(Bax、Bcl-2、Bak、Bcl-xl)在小鼠胚胎發(fā)育的早期表達，且表達情況隨發(fā)育時期的不同而變化。 3.體外無血清培養(yǎng)條件下，凋亡胚胎比率上升，

5、并且Bax基因在桑椹胚期表達量上升，而Bcl-2基因的表達量降低。 4.100ng/mlIGF-1能夠促進小鼠胚胎的生長，提高各時期胚胎發(fā)育比率及囊胚發(fā)育率，降低凋亡胚胎比率。 5.在同類研究中首次直接證明，IGF-1對小鼠早期胚胎發(fā)育過程中Bcl-2家族Bcl-2及Bcl-xl基因的表達有明顯的影響。100ng/mlIGF-1能夠上調(diào)桑椹胚期Bcl-2基因的表達以及桑椹胚期和囊胚期Bcl-xl的表達量;對促凋亡基因