小分子添加劑對(duì)變性溶菌酶復(fù)性產(chǎn)物活性和結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、為了進(jìn)一步分析小分子添加劑對(duì)蛋白質(zhì)活性及結(jié)構(gòu)的影響,本文以溶菌酶為模型蛋白,利用熒光技術(shù)和圓二色技術(shù)對(duì)幾種具有代表性的添加劑從活性、結(jié)構(gòu)及機(jī)理上對(duì)溶菌酶結(jié)構(gòu)的影響進(jìn)行了對(duì)比考察.分析其作用機(jī)制異同點(diǎn)；并基于海藻糖和甜菜堿對(duì)保護(hù)蛋白質(zhì)的作用,考察了海藻糖和甜菜堿在不同濃度鹽酸胍和酶濃度條件下對(duì)溶菌酶輔助復(fù)性和復(fù)性動(dòng)力學(xué)特性,分析了它們作用機(jī)理. 結(jié)果表明,與自發(fā)復(fù)性收率(40﹪)相比,復(fù)性液中添加精氨酸、甘油、乙酰胺、丙酮、硫脲

2、、海藻糖和甜菜堿均能有效提高變性溶菌酶的復(fù)性收率.精氨酸和丙酮都能通過(guò)與變性溶菌酶的靜態(tài)結(jié)合來(lái)輔助溶菌酶復(fù)性,在低鹽酸胍濃度下兩者都可以增加溶菌酶α螺旋的含量,兩者對(duì)溶菌酶的結(jié)構(gòu)所起的作用相似.乙酰胺和硫脲則起著和鹽酸胍近似的作用,能夠抑制肽鏈間的聚集和肽鏈內(nèi)的折疊,但是兩者在本實(shí)驗(yàn)濃度內(nèi)不能使溶菌酶變性.甘油則可以使得溶菌酶宏觀環(huán)境粘度增加宏觀環(huán)境極性增加,使得溶菌酶無(wú)論是在復(fù)性狀態(tài)還是天然狀態(tài),都可以保持一個(gè)較高的α螺旋含量來(lái)保證酶

3、活性喪失減小. 另外,在低鹽酸胍濃度(0.06mol/L)下海藻糖濃度過(guò)大時(shí)可使溶菌酶產(chǎn)生大量α螺旋結(jié)構(gòu),從而使得溶菌酶活性下降；但當(dāng)鹽酸胍濃度升高至2mol/L時(shí),可使溶菌酶的α螺旋結(jié)構(gòu)減少,β折疊結(jié)構(gòu)增多使溶菌酶發(fā)生變性.而甜菜堿無(wú)論是在低濃度鹽酸胍(O.06mol/L)條件下輔助溶菌酶復(fù)性,還是在較高鹽酸胍濃度(2mol/L)下保護(hù)天然溶菌酶,甜菜堿都可以通過(guò)有效保護(hù)溶菌酶的高級(jí)結(jié)構(gòu),從而提高溶菌酶的復(fù)性收率并保持溶菌酶