胰島素樣生長因子Ⅱ受體在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表達上調(diào).pdf

1、目的：在建立病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）小鼠模型基礎(chǔ)上，檢測VMC小鼠不同病變時期心肌組織中胰島素樣生長因子 II受體（insulin-like growth factor II receptor，IGF-IIR）蛋白及mRNA的動態(tài)表達水平，并結(jié)合心肌病理積分，研究 IGF-IIR與心肌損傷的關(guān)系，進一步探討IGF-IIR參與VMC小鼠發(fā)病的可能機制，有可能為進一步防治VMC提供新的治療靶點。
　　

2、方法：將120只雄性4周齡BALB／c小鼠隨機分為兩組：實驗組（VMC組）80只，對照組40只。VMC組小鼠腹腔接種含柯薩奇B3病毒(coxsackie virus B3，CVB3)的DMEM液建立VMC模型，對照組接種等量不含病毒的DMEM液。于感染后第3、7、14、28天，每組各取10只無菌收集心臟標(biāo)本，沿縱切面剖開，一部分用福爾馬林液固定，逐級脫水，石蠟包埋，制片，蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staini

3、ng,HE）染色觀察心肌病理改變并進行病理積分，同時行免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry，IHC）測定心肌IGF-IIR蛋白表達水平；另一部分放入無菌無酶凍存管，迅速放入液氮罐，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱凍存，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)測定心肌IGF-IIR mRNA的相對表達量。分析IGF-IIR蛋白和mRNA

4、的動態(tài)表達水平及其與心肌病變程度的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1、感染 CVB3的 VMC組小鼠陸續(xù)有精神萎靡、少動、脫毛等異常表現(xiàn)，死亡率達23.75％，心臟解剖可見整體水腫，心外膜可見散在點片狀壞死灶，HE染色可見心肌細胞腫脹、變性、壞死、斷裂，核固縮，大量炎癥細胞灶性浸潤；正常對照組小鼠精神飲食正常、活動可，無死亡，心肌組織HE染色心肌纖維排列整齊，未見任何病理改變。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天的心肌病理積分分別為

5、（1.10±0.568分），（2.60±0.699分），（1.40±0.516分），（0.60±0.516分），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；
　　2、IGF-IIR蛋白免疫組化鏡下觀察，對照組小鼠心肌細胞胞漿和胞膜中可見極少量棕黃色顆粒沉積；VMC組小鼠各時間點心肌細胞中染成棕黃色的陽性顆粒明顯增多，著色更深。測平均光密度(optical density,OD)行半定量分析顯示，VMC組小鼠感染病毒后第3天心

6、肌組織中的IGF-IIR蛋白表達開始增多，第7天達到高峰后逐漸下降，直到第28天仍維持在一個較高水平。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天 IGF-IIR蛋白表達水平分別為（0.257±0.0191），（0.396±0.0225），（0.292±0.0132），（0.288±0.0136），與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。
　　3、IGF-IIR mRNA的RT-PCR可見在內(nèi)參和目的基因?qū)?yīng)的泳道上均

7、可見清晰的DNA片段，目的基因片段的灰度值與內(nèi)參灰度值的比值行半定量分析顯示，VMC組小鼠感染病毒后第3天心肌組織中的IGF-IIR的基因表達開始增多，第7天達到高峰后逐漸下降，直到第28天仍維持在一個較高水平。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天 IGF-IIR的基因表達水平分別為（0.584±0.0738），（0.754±0.1090），（0.683±0.0995），（0.636±0.0925），與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)

8、意義(P<0.001)。
　　4、線性相關(guān)分析顯示，VMC組小鼠不同時點免疫組化檢測的IGF-IIR的蛋白表達量與病理學(xué)積分呈正相關(guān)（r=0.628，P=0.000），VMC組小鼠不同時點RT-PCR檢測的IGF-IIR的基因表達量與病理學(xué)積分呈正相關(guān)（r=0.413，P=0.008），且免疫組化檢測的IGF-IIR的蛋白表達量與RT-PCR檢測的IGF-IIR的基因表達量呈正相關(guān)（r=0.465，P=0.003）。
　　結(jié)