2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:建立一種同位素稀釋高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測(cè)定血清1α,25-二羥維生素D2(1α,25(OH)2D2)和1α,25-二羥維生素D3(1α,25(OH)2D3);對(duì)基于不同方法學(xué)的1α,25-二羥維生素D(1α,25(OH)2D)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)及比較;應(yīng)用本研究建立的LC-MS/MS方法測(cè)定表觀健康人群血清1α,25(OH)2D水平,嘗試建立生物參考區(qū)間。
  方法:采集分離血清樣本,以同位素標(biāo)記

2、的1α,25(OH)2D3作為內(nèi)標(biāo),正己烷-乙酸乙酯溶液作為提取劑,高速渦旋提取。離心后吸取上清,37℃真空離心干燥。殘?jiān)眉状?水溶液重構(gòu)后應(yīng)用LC-MS/MS分析技術(shù)進(jìn)行分析檢測(cè)。采用正離子電噴霧離子化的多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式,以標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)合穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)法定量,建立LC-MS/MS法測(cè)定1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3的方法。對(duì)添加不同水平1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3標(biāo)準(zhǔn)品的混合人血清

3、連續(xù)五天進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),每次檢測(cè)每個(gè)水平樣本進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定,以考察方法的精密度。同時(shí)評(píng)價(jià)血清樣本添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的加樣回收率。
  收集2015年4月至6月期間北京協(xié)和醫(yī)院173例患者血清,同時(shí)應(yīng)用本研究建立的LC-MS/MS方法和Diasorin化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)檢測(cè)血清1αα,25(OH)2D3濃度水平并對(duì)Diasorin試劑盒檢測(cè)線性、精密度等性能進(jìn)行評(píng)估。應(yīng)用Excel2007對(duì)檢測(cè)精密度等數(shù)據(jù)及血清樣本檢測(cè)

4、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,比較兩種方法的檢測(cè)性能及臨床樣本檢測(cè)結(jié)果。
  收集2015年7月至2015年9月期間北京協(xié)和醫(yī)院體檢中心200例表觀健康人血清,其中男性與女性各100人,年齡18~87歲。200例表觀健康人群中,有175例年齡小于65歲,從175例血清樣本中隨機(jī)抽取20例血清用于參考區(qū)間驗(yàn)證,剩余155例血清用于參考區(qū)間建立。用本研究建立的LC-MS/MS法測(cè)定血清1α,25(OH)2D3和1α,25(OH)2D2濃度。以非參

5、數(shù)方法估計(jì)樣本的參考區(qū)間,取2.5%~97.5%百分位數(shù)的值作為參考范圍,并采用小樣本驗(yàn)證的方法對(duì)參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。
  結(jié)果:用LC-MS/MS法在本實(shí)驗(yàn)條件下可同時(shí)檢測(cè)血清1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3,化合物保留時(shí)間約為4.7 min,分析時(shí)間為10 min,特異性高,未見明顯干擾因素?;衔锱c內(nèi)標(biāo)峰面積比與對(duì)應(yīng)的濃度線性相關(guān)系數(shù)均大于0.990。1α,25(OH)2D2批內(nèi)和總變異分別為:3.88%~6

6、.35%和5.43%~9.41%,1α,25(OH)2D3批內(nèi)和總變異分別為2.34%~6.79%和5.37%~8.40%。1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3的加祥回收率范圍分別為:95.80%~104.21%和95.91%~99.83%。1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3的檢測(cè)限(LOD)均為5pg/mL,定量限(LOQ)均為10 pg/mL,具有較高的靈敏度。
  Diasorin CLIA法測(cè)

7、定血清1α,25(OH)2D3濃度的批內(nèi)變異分別為2.7%、5.0%和5.0%,總變異分別為13.8%、15.0%和13.5%。取高值(167.8 pg/mL)和低值(36.4pg/mL)兩種血清按不同比例混合稀釋,并用Diasorin試劑盒重復(fù)測(cè)量檢測(cè),評(píng)價(jià)Diasorin CLIA法檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)線性,得到的線性方程為:y=0.916x+3.626(R2=0.991)。173例血清樣本兩種方法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)分析方程為:y=0.96

8、14x+4.3977,R2=0.8041。將兩種方法測(cè)定173例患者血清樣本結(jié)果作Bland-Altman圖,差值范圍為-23.1 pg/mL~26.1 pg/mL,5.78%(10/173)的樣本檢測(cè)結(jié)果落在95%一致性界限以外。LC-MS/MS法獲得人群的95%參考區(qū)間為32.9 pg/mL~112.5 pg/mL。
  結(jié)論:本研究成功建立了同時(shí)測(cè)定血清1α,25(OH)2D2和1α,25(OH)2D3的LC-MS/MS方法

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