人體頭發(fā)中興奮劑液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法的研究.pdf

1、目的：本論文以易被運(yùn)動(dòng)員濫用或檢測(cè)難度較高的興奮劑為主要研究對(duì)象，利用具有高分離效能和結(jié)構(gòu)確證功能的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜來(lái)探索、建立毛發(fā)中興奮劑(酯類(lèi)、母體、代謝物)的檢測(cè)和評(píng)價(jià)方法，并使用建立的檢測(cè)方法檢測(cè)高血壓患者頭發(fā)中的β-阻斷劑（美替洛爾和比索洛爾）和運(yùn)動(dòng)員頭發(fā)β2-激動(dòng)劑（克侖特羅），以證明檢測(cè)方法的有效性，為采用毛發(fā)檢測(cè)興奮劑建立技術(shù)儲(chǔ)備。
　　方法：稱(chēng)取50mg頭發(fā)，加入5μl d3-睪酮作內(nèi)標(biāo)，100μl蛋白酶K和1

2、00μl二硫蘇糖醇在三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液中55℃水解2小時(shí)，加入正戊烷/乙醚，振蕩、離心和冷凍，倒出上層有機(jī)相。融化下層后加入磷酸緩沖液、5μl內(nèi)標(biāo)和三氯甲烷/異丙醇振蕩、離心和吸取上層液體后兩次有機(jī)相混合吹干，最后用甲醇、流動(dòng)相A和正己烷除去油脂，復(fù)溶（90％流動(dòng)相A）后10μl進(jìn)樣分析。由于酯類(lèi)和非酯類(lèi)復(fù)溶液不同，酯類(lèi)和非酯類(lèi)分開(kāi)處理檢測(cè)，酯類(lèi)50mg頭發(fā)，加10μl內(nèi)標(biāo)同上水解方法，加入正戊烷，振蕩、離心和冷凍，吹干復(fù)溶液（

3、90%流動(dòng)相B）復(fù)溶后20μl進(jìn)樣分析。
　　結(jié)果與討論：通過(guò)優(yōu)化色譜和質(zhì)譜條件，非酯類(lèi)和酯類(lèi)分別采用X Bridge RP18(3.5μm，100mm×2.1mm)和Agilent ZORBAX XDB-C18（3.5μm，50mm×2.1mm）色譜柱，相對(duì)應(yīng)的流速為0.2ml/min和0.4ml/min，最優(yōu)進(jìn)樣量分別為10μl和20μl和最佳液相組成為2.5mM甲酸銨-0.2%甲酸-甲醇/乙腈（v：v=7:3）和2.5mM甲

4、酸銨-0.2%甲酸-甲醇/乙腈（v：v=7:3）體系。前處理優(yōu)化使非酯類(lèi)檢測(cè)選擇使用正戊烷/乙醚和氯仿/異丙醇兩步液液萃取，酯類(lèi)選擇了正戊烷液液萃取。方法驗(yàn)證中得出線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)、最低檢測(cè)限和最低定量限滿(mǎn)足日常定量要求和頭發(fā)中檢測(cè)興奮劑靈敏度的要求，大多數(shù)藥物日間精密度<20%，日內(nèi)精密度<20%，回收率在50%以上并且基質(zhì)效應(yīng)多在80%-120%之間，符合一般驗(yàn)證要求。將建立的檢測(cè)方法進(jìn)行方法驗(yàn)證和評(píng)估后應(yīng)用于患高血壓患者頭發(fā)中β-阻斷