PGC-1α調(diào)節(jié)黃體生成素和醛固酮合成以及葡萄糖激酶表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：l0023學(xué)號(hào)：b2007186PGC1Q調(diào)節(jié)黃體生成素和醛固酮合成以及葡萄糖激酶表達(dá)的分子機(jī)制研究研究生：朱繆孌導(dǎo)師：方福德教授常永生副教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：2型糖尿病易感基因的研究入學(xué)時(shí)間：2005年9月所在院所：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博上學(xué)位論文第一部分PGC1僅協(xié)同SF1調(diào)節(jié)黃體生成素和醛固酮合成的研究摘要過(guò)氧化物酶體增殖激活受體丫共激活因子1a(PGC1僅)能共刺激多種轉(zhuǎn)錄因子

2、從而調(diào)節(jié)能量代謝進(jìn)程。核受體類(lèi)固醇激素生成因子(SF1)在垂體、性腺、腎上腺等內(nèi)分泌組織中高表達(dá)，轉(zhuǎn)錄調(diào)控多種關(guān)鍵基因，同時(shí)調(diào)節(jié)下丘腦垂體性腺軸多水平的激素合成。為探索PGC1Q在類(lèi)固醇激素合成及垂體激素分泌中的作用，本課題以小鼠垂體促性腺Q(mào)T31細(xì)胞為研究模型，過(guò)表達(dá)PGC1a后，通過(guò)realtimePCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到LHp和QGSU在mIⅢA水平的表達(dá)量升高，又進(jìn)一步通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)證明，PGC1a刺激0【T31細(xì)胞

3、分泌的黃體生成素增加。分析LHB啟動(dòng)子序列，發(fā)現(xiàn)127bp—119bp位點(diǎn)存在一個(gè)SFl結(jié)合元件GSE(gor砌otropespecificelernem)，突變?cè)撛螅p熒光報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明SF1和PGC1a對(duì)LHp啟動(dòng)子的刺激作用全部消失。染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證明PGC10【與SF1共定位在LHp啟動(dòng)子區(qū)含GSE元件的區(qū)域，并促進(jìn)LHD轉(zhuǎn)錄。為進(jìn)一步證明PGC1a對(duì)SF1的共刺激作用，分析了二者相互作用的分子機(jī)制。哺乳動(dòng)物雙雜交實(shí)驗(yàn)和免

4、疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明PGC1a與SF1能在體內(nèi)形成復(fù)合物，進(jìn)一步GSTpulldo、Ⅳn實(shí)驗(yàn)證明二者能直接相互作用。該作用發(fā)生在PGC1僅的N端1～180氨基酸區(qū)域(含LXXLL模體，142～146氨基酸)與SF1C端187~462氨基酸區(qū)之間。構(gòu)建不同長(zhǎng)度的SF一1基因表達(dá)片段發(fā)現(xiàn)，只有當(dāng)SF1的最適激活結(jié)構(gòu)域(proximlactivationdomain)和AF2結(jié)構(gòu)域同時(shí)存在時(shí)，PGC1a和SF—l才能直接結(jié)合。腎上腺皮質(zhì)是最主要的