腦出血中PGC-1α的作用和機(jī)制.pdf

1、背景：腦出血是一種在腦實(shí)質(zhì)中發(fā)生的血管性的自發(fā)性的出血，其急性期病死率高，至今發(fā)病的機(jī)制仍不太清楚，其治療手段也很有限。有研究表明血腫周圍帶的能量代謝障礙在腦出血中起著重要的作用。在生物體內(nèi)，線粒體是供應(yīng)能量的主要來(lái)源。在腦出血中，線粒體的功能和結(jié)構(gòu)損傷與腦的能量代謝障礙直接相關(guān)。PGC-1α是核轉(zhuǎn)錄的共激活因子，對(duì)眾多生理功能都有重要的調(diào)節(jié)作用，例如促進(jìn)線粒體的生物合成，調(diào)節(jié)糖代謝等。尤其是對(duì)能量平衡，PGC-1α起到了重要的調(diào)節(jié)作用

2、。在腦缺血中，PGC-1α參與了線粒體的生物合成和氧化應(yīng)激，而線粒體的生物合成增多又促進(jìn)了神經(jīng)元的存活。在腦出血中其PGC-1α相關(guān)研究并不清楚。我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中將探討PGC-1α在腦出血后的神經(jīng)保護(hù)作用及其線粒體生物合成相關(guān)的保護(hù)機(jī)制。
　　目的：探討PGC-1α在大鼠腦出血后的保護(hù)作用和有關(guān)機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用大鼠自體股動(dòng)脈血建立大鼠腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?。將用于?shí)驗(yàn)的動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分配，分組為：假手術(shù)組(sham group)、

3、腦出血組（ICH group）、ICH+非特異性siRNA組（ICH+nontrol siRNA group）、ICH+特異性siRNA組（ICH siRNA group）。腦出血組（ICH group）用微量注射泵在右側(cè)基底節(jié)處定向性注射50ul大鼠自體股動(dòng)脈血，處理組于ICH模型前24h采用右側(cè)側(cè)腦室注射。討論P(yáng)GC-1α在腦出血后是否對(duì)腦有保護(hù)作用及其可能的保護(hù)機(jī)制：（1）在建立大鼠腦出血模型后1h,6h,12h,24h,48h,

4、 and72h后，各個(gè)時(shí)間段的大鼠模型斷頭，提取不同腦部位的組織蛋白。運(yùn)用Western blot蛋白印跡法檢測(cè)PGC-1α在大鼠腦出血后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況。大鼠腦出血后72h，提取大腦不同部位的腦組織蛋白。運(yùn)用Q-PCR和Western blot測(cè)定PGC-1α在大鼠腦組織中不同部位的表達(dá)情況。（2）對(duì)Sham組、ICH組、ICH+nontrol siRNA和 ICH+siRNA組大鼠運(yùn)用 Quantitative PCR及West

5、ern blot檢測(cè)PGC-1αmRNA和蛋白的表達(dá),然后在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定神經(jīng)功能學(xué)的評(píng)分，在左右大腦半球測(cè)定大腦的含水量。（3）運(yùn)用Western blot方法測(cè)定與線粒體生物合成相關(guān)蛋白（NRF1、TFAM、SOD2、UCP2）的情況。Quantitative PCR法檢測(cè)線粒體 DNA。高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)ATP的濃度。透射電鏡檢測(cè)線粒體的形態(tài)學(xué)及數(shù)量變化。
　　結(jié)果：（1）PGC-1α的表達(dá)在大鼠腦出血后增高，并

6、在72h明顯增高。PGC-1α的表達(dá)在大鼠腦出血同側(cè)紋狀體表達(dá)最明顯。
　?。?）同ICH nontrol siRNA組相比較，發(fā)現(xiàn)siRNA明顯抑制PGC-1α的mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)。 PGC-1αsiRNA能明顯降低神經(jīng)功能評(píng)分和增加出血同側(cè)的腦含水量。
　?。?）腦出血后，線粒體生物合成相關(guān)蛋白（NRF1、TFAM、SOD2、UCP2）的表達(dá)、線粒體DNA的含量、線粒體的數(shù)量增高，干擾PGC-1α后，其均明顯減低，并