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文檔簡介
1、第一章電熱損傷法建立新西蘭大白兔宮腔粘連模型
目的:宮腔粘連(Intrauterine adhesions,IUAs)指因為各種因素造成子宮內(nèi)膜基底層損傷,在創(chuàng)傷愈合過程中,子宮內(nèi)膜表面出現(xiàn)局部瘢痕或形成粘連帶粘連在一起,造成宮腔部分或完全閉塞,臨床表現(xiàn)為月經(jīng)失調(diào)、盆腔痛等,嚴重者可能導(dǎo)致閉經(jīng)、不孕、自發(fā)性流產(chǎn)等結(jié)果,對女性生育功能有著重大的影響,是導(dǎo)致女性不孕的重要因素。然而目前其發(fā)病機制及治療方法仍未明確和統(tǒng)一,因此建立一
2、個穩(wěn)定有效的宮腔粘連動物模型,則成為開展相關(guān)研究的前提和基礎(chǔ)。本文旨在利用機械損傷和電熱損傷法構(gòu)建兔IUA模型,觀察比較兩種方法的建模效果。
方法:42只成年雌性新西蘭大白兔隨機分為機械損傷組和電熱損傷組,每組21只。兩組分別以機械刮宮和醫(yī)用多功能高頻電刀電灼損傷兔一側(cè)子宮內(nèi)膜模擬宮腔粘連形成,以另一側(cè)子宮作為自身對照,分別比較損傷側(cè)和對照側(cè)子宮病理變化、腺體數(shù)量、纖維化面積及胚胎個數(shù),評估兩種方法建模效果及造成的子宮內(nèi)膜損傷
3、對兔生育力的影響。其中機械損傷組兔的損傷側(cè)子宮為M-A組,對照側(cè)子宮為M-B組;電熱損傷組兔的損傷側(cè)子宮為E-A組,對照側(cè)子宮為E-B組。分別在損傷后7d、14d和28d收集兔雙側(cè)子宮組織,行HE和Massoon染色觀察兩側(cè)子宮內(nèi)膜病理改變,并對兩側(cè)子宮內(nèi)膜的腺體個數(shù)和內(nèi)膜纖維化面積比進行統(tǒng)計學(xué)分析和比較。另外將損傷后7d的雌兔與成年雄兔合籠,14天后觀察比較兩側(cè)子宮胚胎個數(shù)。
結(jié)果:兩種建模方法均未見明顯纖維粘連帶形成。病理
4、組織學(xué)觀察顯示機械損傷組術(shù)后7d,M-A組損傷內(nèi)膜腺體數(shù)量較B組減少,間質(zhì)水腫、白細胞浸潤,毛細血管充血、阻塞,可見少量新生毛細血管;術(shù)后14d和30d,M-A組和M-B組子宮內(nèi)膜切片HE染色鏡下顯示并沒有明顯的差異,損傷后的子宮內(nèi)膜已完全修復(fù)。電熱損傷組建模術(shù)后7d,與E-B組相比,E-A組宮腔皺襞減少,表面稍平坦,基本被柱狀上皮細胞覆蓋,腺體數(shù)量明顯減少,間質(zhì)水腫、白細胞浸潤,毛細血管充血、阻塞,可見少量新生毛細血管;術(shù)后14d,E
5、-A組宮腔表面皺襞仍少,表面較平坦,上皮基本全部被柱狀上皮細胞覆蓋,腺體個數(shù)仍較少,間質(zhì)水腫不再明顯,可見少量白細胞浸潤,新生毛細血管增多;術(shù)后28d,E-A組子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)基本恢復(fù)正常,可見較多新生腺體,未見間質(zhì)充血和淋巴細胞浸潤。
機械組損傷后7d,M-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量較M-B組減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);機械損傷后14d、30d,M-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量與M-B組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。電熱損傷后7d和14
6、d,E-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量較E-B組減少,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而電熱損傷后30d E-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量與E-B組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
機械損傷后7d,M-A組內(nèi)膜纖維化面積比與M-B組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義;電熱損傷后7d,E-A組內(nèi)膜纖維化面積比較E-B組增大,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
M-A組子宮胚胎個數(shù)與M-B組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義;E-A組子宮胚胎個數(shù)較E-B組減少,差異有統(tǒng)計
7、學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:利用機械損傷法很難建立穩(wěn)定有效的兔宮腔粘連模型。盡管未見明顯纖維粘連帶形成,電熱損傷造成的胚胎個數(shù)的減少說明采用電熱損傷法建立的兔宮腔粘連模型在損傷后7-14天是穩(wěn)定有效的。
第二章人離體子宮冷灌注及冷缺血保存的安全區(qū)間
目的:離體子宮保存是子宮移植過程中需要解決的一項關(guān)鍵問題,良好科學(xué)的子宮灌注和保存方法是保證子宮移植成功的重要前提。本文旨在探討人離體子宮利用組氨酸-色氨酸
8、-酮戊二酸鹽(Histidine-tryptophane-ketoglutarate,HTK)液冷灌注及冷缺血保存的安全區(qū)間,為子宮移植的相關(guān)研究及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和參考。
方法:樣本為人離體子宮7例,來源于行子宮切除術(shù)的宮頸癌患者。其中3例用HTK液在低溫條件下經(jīng)子宮動脈灌注,測量并記錄一定灌注壓力所對應(yīng)的灌注高度,建立灌注高度與灌注壓之間的數(shù)學(xué)關(guān)系模型;4例在適當灌注高度下進行短時間冷灌注,然后立刻取子宮內(nèi)膜及肌組織分
9、別于HTK保存液和生理鹽水(normal saline,NS)中保存,兩組又根據(jù)保存時問(0、3、6、24h)的不同分為0h組、HTK3h組、HTK6h組、HTK24h組、NS3h組、NS6h組和NS24h組,利用光學(xué)和電子顯微鏡觀察各組子宮組織細胞形態(tài)學(xué)改變,測定并比較各組子宮平滑肌收縮能力,分析離體子宮短時灌注后冷缺血保存的最佳時限。
結(jié)果:灌注壓90~140mmHg對應(yīng)的灌注高度為62~122cm,理論灌注高度H與灌注壓
10、P關(guān)系公式為H(m)=(128μl1/πd14·n·Δv/60+128μl2/πd24·n·Δv/60+133·P)/(pg)-0.470。與0h組比較,HTK3h組和HTK6h組的子宮組織在光學(xué)和電子顯微鏡下形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)均未見明顯改變,但HTK24h組及所有的NS組的子宮組織均出現(xiàn)不同程度的細胞水腫、細胞間失去聯(lián)系、線粒體腫脹及染色質(zhì)粗染等不可逆的退行性改變;HTK3h、HTK6h和HTK24h三組子宮肌組織的肌收縮力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(
11、P=0.772);而與相同時段HTK組標本相比,NS3h、6h和24h組子宮肌組織的肌收縮力均明顯降低(P<0.05)。
結(jié)論:人類離體子宮組織在低溫環(huán)境下利用HTK液灌注的安全高度是62~122cm,理論灌注高度H與灌注壓P關(guān)系模型公式為H(m)=(128μl1/πd14·n·Δv/60+128μl2/πd24·n·Δv/60+133·P)/(ρg)-0.470。人離體子宮短時灌注后于4℃ HTK液中保存可耐受冷缺血時間至少
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