回收自體血中腦膜瘤干細胞檢測的初步研究.pdf

1、目的：
　　通過回收腦膜瘤手術野流失的血液，并進行抗凝、濾過、離心、洗滌及凈化，將得到的紅細胞懸液進行光學顯微鏡觀察和流式細胞儀檢測，明確紅細胞懸液中腦膜瘤干細胞的含量，評估自體血回輸技術的安全性，為其在腦膜瘤手術治療中的臨床應用提供試驗依據。
　　方法：
　　選取2014年06月～2015年12月，于鄭州大學第五附屬醫(yī)院擇期進行手術治療的腦膜瘤患者89例，其中因患者及家屬拒絕使用自體血回輸、合并顱內感染或ASA分級Ⅲ

2、級以上等原因剔除19例，最終入選腦膜瘤患者70例。自手術切皮至縫皮實施血液回收，嚴格遵照血液回收、清洗、回輸流程進行操作。選取分離切除腦膜瘤時的腫瘤組織出血（B1）、儲血罐內收集的血液（B2）、經離心及洗滌后的血液（B3）三組標本，用推片法將三組血液標本分別制成血細胞單層排列的血涂片，干燥后在光學顯微鏡下觀察并辨認細胞形態(tài)。制備B1、B2及B3血液標本，分別使用流式細胞術直接免疫熒光法檢測其CD133、CDl66的陽性表達情況，并建立二

3、維點圖。術中取腫瘤組織，固定、石蠟包埋并切片，應用蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）進行免疫組化染色，在鏡下觀察、診斷腫瘤組織類型，并采集圖像。
　　結果：
　　70例患者平均年齡52.87±17.29歲，男性37例（52.86％），女性33例（47.14%）。ASAⅡ級患者22例（31.43%），ASAⅢ級患者48例（68.57%）。術中共回收自體血25176ml，每例患者平均

4、回收自體血359.66±169.72ml。在光學顯微鏡下可見：B1血涂片含有大量的組織碎片、破壞的細胞基質、游離的血紅蛋白等組織，但未觀察到異常形態(tài)的腫瘤細胞。B2血涂片中組織碎片、破壞的細胞基質、游離的血紅蛋白等組織顯著減少，但含有部分形態(tài)異常的紅細胞。B3血涂片紅細胞大小一致，變化均一，鏡下未見其它異常形態(tài)細胞及組織碎片等。所有患者的病理結果均為腦膜瘤，腦膜瘤病理分型不同，其鏡下的形態(tài)結構亦存在相應差異。經流式細胞術檢測分析顯示：B

5、1血標本中，CD133的陽性表達率為0.54%，CD166的陽性表達率為3.46%，CD133及CD166均為陽性的表達率為零；B2血標本中，CD133的陽性表達率為0.43%，CD166的陽性表達率為3.58%，兩者均為陽性的表達率同樣為零；B3血標本中，CD133的陽性表達率為0.39%，CD166的陽性表達率為2.75%，CD133及CD166兩者均為陽性的表達率為零。
　　結論：
　　經自體血回收機過濾、離心、分離、