WWP1、P53在瘢痕疙瘩和正常皮膚中的差異表達及意義.pdf

1、背景與目的：近年來人們對泛素化過程參與多種腫瘤的形成認識越來越深入，E3泛素連接酶為泛素化過程中特異性識別底物的酶，其參與腫瘤的機制可能與其對細胞的增殖、衰老及信號通路的調控紊亂有關。2010年日本學者GWAS研究發(fā)現(xiàn) E3泛素連接酶 NEDD4-1基因可能與瘢痕疙瘩有關。E3泛素連接酶WWP1(The WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase1），為NEDD4蛋白家族成員之一，與

2、該家族其他蛋白一樣也包含HECT及WW結構域。WWP1已被證實在多種腫瘤中表達異常，其中乳腺癌和前列腺癌是報道最為詳實的兩種類型。P53基因是一種公認的抑癌基因，位于染色體17q13.1，與腫瘤發(fā)病機制的研究眾多，參與細胞凋亡及細胞周期調控、DNA損傷修復、腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程。瘢痕疙瘩以侵襲性生長為特征的成纖維細胞增殖凋亡異常及細胞外基質過度沉積的疾病，可能與控制凋亡的基因功能缺失有關。本實驗通過免疫組織化學法（Immunohistoc

3、hemistry，ICH）和RT-PCR法分別檢測瘢痕疙瘩與正常皮膚組織WWP1、P53表達并比較是否有差異，進而探討二者與瘢痕疙瘩形成是否相關。
　　材料與方法：選取瘢痕疙瘩標本10例，年齡10~52歲（33.1±9.7），其中男6例，女4例，正常皮膚標本10例年齡10~52歲（31.8±7.4），所取標本分為2部分，一部分行RT-PCR，檢測組織中WWP1、P53mRNA表達；另一部分作免疫組化，檢測組織中WWP1、P53蛋白

4、表達。將-80 ℃液氮中保存的瘢痕疙瘩組織及正常皮膚組織取出放入加了 TRIzol RNA提取液的勻漿器，提取組織中總RNA，并用紫外分光光度計檢測 RNA濃度和純度，將 RNA逆轉錄為 cDNA,進行 PCR擴增。另一部分組織經(jīng)切片、脫蠟、加入抗體、孵育、顯色，脫水封片后顯微鏡下觀察并拍照。使用Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng)進行分析，測定泛素轉移酶E3及P53蛋白累積光密度（Integrated Optical Densit

5、y, IOD）值。
　　結果：對兩組中P53蛋白染色發(fā)現(xiàn)，瘢痕疙瘩組織內少見陽性細胞，瘢痕疙瘩組織中P53蛋白染色IOD值顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而瘢痕疙瘩組織泛素連接酶 E3 WWP1染色 IOD值顯著增加且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與正常皮膚相比，瘢痕疙瘩組織泛素連接酶E3 WWP1 mRNA表達水平顯著增加，而P53 mRNA的表達情況相較對照組顯著減少，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。