瘢痕疙瘩p53基因突變的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:檢測瘢痕疙瘩組織及其成纖維細胞p53基因突變,進一步研究野生型p53基因的瘢痕疙瘩成纖維細胞生長和凋亡中的作用,以探討p53基因突變在瘢痕疙瘩形成和發(fā)展中的作用和意義.方法:第一部分:瘢痕疙瘩和正常產痕患者各12例共24人,取瘢痕疙瘩和正常瘢痕組織,并分別采用同一患者正常皮膚及血標本作為對照,體外培養(yǎng)所取瘢痕組織和皮膚組織的成纖維細胞,采用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態(tài)性分析方法(PCR-SSCP)和基因測序,檢測各組織及相應成纖維細

2、胞p53基因4-8外顯子的突變.第二部分:野生野p53基因重組腺病毒載體(Ad-p53)體外轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞,采用Northern Blot和Western Blot方法檢測外源性野生型p53基因的表達.第三部分:野生型p53基因重組腺病毒載體(Ad-p53)體外轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞,采用MTT法進行細胞計數(shù),繪制細胞生長曲線,流式細胞儀檢測細胞周期及DNA梯度電泳檢測細胞的生長和凋亡.結果:第一部分:采用PCR-SSCP和基因

3、測序,檢測到9例瘢痕疙瘩組織及其成纖維細胞p53基因4-7外顯子的7種點突變和移碼突變.正常瘢痕組織,正常皮膚組織、相應成纖維細胞和血標本均本檢測到突變.第二部分:野生型p53基因重組腺病毒載體(Ad-p53)可高效地體外轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞,轉染后1d外源基因出現(xiàn)表達,3d達到峰值后逐漸下降.外源性p53mRNA和P53蛋白可在轉染后成纖維細胞有效表達.第三部分:與未轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞相比,轉染野生型p53基因的瘢痕疙瘩成纖維細

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