溫腎健脾法對潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸組織中負性調控因子SOCS2-3基因和蛋白表達影響的研究.pdf

1、研究目的：
　　潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種臨床表現復雜多樣的炎性腸?。↖BD，inflammatory bowel disease），以結腸粘膜彌漫性炎癥為特點。近年來，UC的發(fā)病率持續(xù)增長，且具有癌變的高風險性，但是現代醫(yī)學對其仍舊缺乏特異性的療法，給患者和社會均帶來了嚴重的影響。目前研究表明，UC的發(fā)病與JAK/STAT信號通路過度激活導致腸粘膜免疫穩(wěn)態(tài)失衡密切相關，因此需要對JAK/ST

2、AT信號通路的開啟和傳導進行精密的負性調控，避免過強的免疫應答，從而恢復免疫平衡。本課題從負性因子調控的角度出發(fā)，選擇JAK/STAT信號通路上的負性調控因子SOCS2、SOCS3，從基因和蛋白的水平探討四神丸治療脾腎陽虛型UC的作用機制。
　　研究方法：
　　采用番瀉葉灌胃+氫化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌腸法建立脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎大鼠模型。將90只wistar大鼠隨機分為空白

3、組、模型組、柳氮磺嘧啶（SASP）組及四神丸高、中、低劑量組，造模成功后，除空白組外，四神丸高、中、低劑量組分別給予以四神丸生藥10、5、2.5g/kg/d灌胃治療；SASP組給予SASP混懸液0.36g/kg/d灌胃治療，模型組予等量的生理鹽水灌胃治療，共計21天。21天后處死老鼠取結腸，觀察大鼠形態(tài)及結腸損傷情況，光鏡下觀察大鼠結腸病理改變，采用RT-qPCR法檢測各種大鼠結腸中的SOCS的基因表達；采用SP免疫組化和WB免疫印跡法

4、檢測各組大鼠結腸中的SOCS2、SOCS3的蛋白表達。
　　結果：
　　1.RT-qPCR法檢測結果 SOCS：與空白組比較，模型組表達顯著降低（P<0.01），與模型組比較，各治療組表達明顯升高（P<0.01，P<0.05）。
　　2.SP法檢測結果（1）SOCS2①陽性細胞在空白組大鼠結腸組織中的粘膜下層、粘膜層中有高表達，表現為棕黃色顆粒，模型組為低表達，各治療組呈較高或中等表達。②平均光密度值結果：與空白組比較

5、，模型組SOCS2表達顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，各治療組表達明顯升高（P<0.01）。（2）SOCS3①陽性細胞在空白組大鼠結腸組織中的粘膜層、肌層中有高表達，表現為棕黃色顆粒，模型組為低表達，各治療組呈較高或中等表達。②平均光密度值結果：與空白組比較，模型組SOCS3表達顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，各治療組表達明顯增強（P<0.01，P<0.05）。
　　3.Wb法檢測結果（1）SOCS2：與空白組比較

6、，模型組表達顯著降低（P<0.01），與模型組比較，各治療組表達明顯升高（P<0.01，P<0.05）。（2）SOCS3：與空白組比較，模型組表達顯著降低（P<0.01），與模型組比較，各治療組表達明顯升高（P<0.01）。
　　結論：
　　1.番瀉葉灌胃+氫化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌腸法能成功的復制脾腎陽虛型潰瘍性結腸炎大鼠模型。
　　2.脾腎陽虛是UC的重要病機，脾腎陽