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文檔簡介
1、目的:
潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)是一種直腸和結(jié)腸粘膜的炎癥疾病,其病因尚不明確,研究表明易感基因、環(huán)境和免疫系統(tǒng)等在UC的發(fā)病中占有很重要的作用,其中免疫系統(tǒng)的參與尤其重要。隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科的迅速發(fā)展,以及近年來對細(xì)胞因子、粘附分子的研究,尤其是核因子-κB(NF-κB)及Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)的研究,UC的發(fā)病機制正逐步得以揭示,T
2、LRs/NF-κB通路的部分闡明也為尋找UC的治療提供了新的契機,通過抑制此通路的關(guān)鍵分子進而阻斷UC過激的炎癥反應(yīng)已成為眾多學(xué)者研究的方向。
中醫(yī)藥在UC的治療上有不可輕視的療效,而中醫(yī)藥治療UC的作用機理研究是目前中醫(yī)藥治療UC的重中之重。中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院在多年臨床經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,以清熱解毒為治則,總結(jié)出治療’UC的復(fù)方青黛顆粒(CQDG)并在臨床上取得了較好的療效,無明顯毒副作用。前期研究采用三硝基苯磺酸法(T
3、NBS)制作潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型,發(fā)現(xiàn)復(fù)方青黛顆粒能明顯減少潰瘍性結(jié)腸炎大鼠疾病活動指數(shù)(DAI),結(jié)腸組織學(xué)損傷評分(CDMI評分),降低結(jié)腸粘膜中炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1、ICAM),因此復(fù)方青黛顆粒對TNBS法潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型有較好的治療作用。本研究擬從細(xì)胞因子、粘附分子表達的源頭TLRs/NF-κB通路入手,觀察復(fù)方青黛顆粒對此通路的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)TLR2、TLR4的作用,探討復(fù)方青黛顆粒治療UC的深層次作用機理。這一研
4、究將使中醫(yī)藥治療UC的機理研究深入到基因調(diào)控水平,并為開發(fā)高質(zhì)量的抗UC中藥新藥打下堅實的基礎(chǔ),有重要的理論意義和廣闊的應(yīng)用前景。
材料與方法:
實驗分組:取體重(250±50)g雄性SD大鼠52只,隨機分為6組:正常對照組(空白組),模型組,復(fù)方青黛顆粒治療組(低劑量組,600 mg/Kg、中劑量組,900 mg/Kg、高劑量組,1200 mg/Kg),陽性藥物治療組(柳氮磺胺吡啶組500mg/Kg)。
5、r> 實驗方法:TNBS法制備大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型。造模后第3天開始各組動物灌胃給藥,連續(xù)給藥10天,實驗第14天,處死大鼠,剖取大鼠直腸及結(jié)腸,一部分液氮速凍,并置于-80℃冰箱RT-PCR待測,另一部分10%中性甲醛溶液固定,免疫組化待用。
檢測指標(biāo):大鼠疾病活動指數(shù)(DAI)、組織學(xué)損傷評分(CMDI)、結(jié)腸組織TLR2及TLR4mRNA表達水平,結(jié)腸組織TLR4蛋白表達水平。
結(jié)果:
6、 復(fù)方青黛顆粒高劑量組能顯著降低實驗大鼠DAI積分(0.87±0.85 vs2.83±0.62,P<0.01)及CDMI評分(1.38±0.52 vs2.63±0.74,P<0.01),而且可以劑量依賴性的下調(diào)結(jié)腸組織中TLR2mRNA(1.99±0.11 vs2.39±0.21,P<0.05),(1.86±0.13 vs2.39±0.21,P<0.05),TLR4mRNA(2.29±0.55 vs3.00±0.83,P<0.05
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