他汀類藥物預處理對小鼠心肌缺血再灌注的影響及不同用藥模式下的抗炎效果.pdf

1、目的：冠心?。╟oronary atherosclerotic heart disease，CHD）已經成為影響人類生命質量和健康水平的最重要疾病之一。近30年來，介入技術的突破性進展和普及應用，使得冠心病的治療方式和療效極大改善。但伴隨溶栓治療、支架置入、冠狀動脈旁路移植術等方式重新恢復梗塞冠脈血供，心肌缺血/再灌注（myocardial ischemia/reperfusion，MI/R）損傷的發(fā)生卻使得血運重建的患者不僅未從相關血

2、管再開通中受益，反而加重了心臟血流動力學障礙和心肌損傷，甚至最終導致死亡。作為目前臨床中常用的動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）和急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）治療藥物，他汀類藥物（statins）除了本身的調脂作用，還具有穩(wěn)定動脈硬化斑塊，改善血管內皮功能，免疫調節(jié)等多重藥理效應?；诖朔N多重藥理效應，他汀類藥物在心血管疾病中的應用值得進一步探索。本研究擬選取新一代他汀類藥物

3、中具有代表性的瑞舒伐他?。≧osuvastatin），并在小鼠MI/R模型中多節(jié)點、多時段、多步驟，分析其與MI/R損傷炎癥因子、炎癥反應和心肌細胞凋亡之間的關系，探討他汀類藥物對MI/R損傷的保護作用和潛在機制，分析他汀類藥物抗心肌細胞凋亡的潛在機制。本研究還擬通過比較不同用藥模式下瑞舒伐他汀的抗炎作用和療效，觀測他汀類藥物的劑量、負荷量、及頻次變化，對MI/R損傷炎癥因子和炎癥反應的影響，探討他汀類藥物在保護MI/R損傷時科學、合理

4、的用藥方式，為冠心病患者的臨床治療策略提供更有意義的依據。
　　方法：
　　1．將120只C57 BL/6小鼠隨機分為3組，即正常對照組（Sham組）、缺血/再灌注組（MI/R組）、缺血/再灌注+瑞舒伐他汀預處理組（MI/R+R組），每組40只。MI/R+R組于術前第7天開始，每日空腹給予瑞舒伐他汀5 mg/kg灌胃一次，連續(xù)7天。Sham組和MI/R組則給予生理鹽水灌胃，劑量與方法同MI/R+R組。將3組小鼠于MI/R后1

5、 h，分別隨機選取8只，進行血漿腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）與超敏C反應蛋白（high-sensitivity C-reactive protein， hs-CRP）含量檢測，分析炎癥因子水平。將3組小鼠隨機選取16只，于MI/R后3 h分別進行脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法染色（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL）和Casp

6、ase-3活性檢測，檢測心肌細胞凋亡情況。將3組小鼠于MI/R后24 h，分別隨機選取8只，進行伊文式藍/2,3,5—氯化三苯基四氮唑（Evans blue/2,3,5-triphenyltetrazolium chloride，Evans blue/TTC）雙染色，明確小鼠的左心室（left ventricular，LV）面積，缺血心肌面積（area at risk，AAR）和心肌梗死面積（inf-arctareal，inf），并計算

7、小鼠的總缺血面積（AAR/LV3100％）和心肌梗死面積（inf/AAR3100%）
　　2．將60只C57BL/6小鼠隨機分為5組，即假手術組（Sham組）、缺血/再灌注組（MI/R組）、缺血/再灌注+正常劑量組（MI/R+R組）、缺血/再灌注+術前負荷劑量組（MI/R+SL）、缺血/再灌注+連續(xù)負荷劑量組（MI/R+ML）。MI/R+R組于術前第7天開始，每日空腹給予瑞舒伐他汀5 mg/kg灌胃一次，連續(xù)7天；MI/R+SL組

8、于術前8 h，空腹一次性給予瑞舒伐他汀灌胃20 mg/kg；MI/R+ML組于術前第7天開始，每日空腹給予瑞舒伐他汀20 mg/kg灌胃一次，連續(xù)7天；Sham組和MI/R組給予生理鹽水灌胃，劑量與方法同MI/R+R組。各小鼠于在MI/R發(fā)生后，1 h、3 h、8 h、24 h及3d、7d分別檢測血漿TNF-α與hs-CRP含量。
　　結果：
　　1．在小鼠MI/R后1 h， MI/R+R組和MI/R組的血漿hs-CRP和T

9、NF-α含量均高于Sham組（P均<0.05），但經瑞舒伐他汀預處理后，MI/R+R組的血漿hs-CRP（0.64±0.23 mg/L vs.1.51±0.24 mg/L，P<0.05）和TNF-α（137.40±3.64pg/ml vs.161.55±8.05pg/ml，P<0.05）水平明顯低于MI/R組。
　　2．在小鼠MI/R后3 h，MI/R+R組和MI/R組的TUNEL染色陽性率和Caspase-3活性高于Sham組（

10、P均<0.05），但MI/R+R組的TUNEL染色陽性率和Caspase-3活性低于MI/R組（P均<0.05）。
　　3．在小鼠MI/R后24 h，MI/R+R組和MI/R組的總缺血面積（AAR/LV3100%）均明顯高于Sham組（P均<0.05），MI/R+R組和MI/R組之間的總缺血面積無明顯統(tǒng)計學差異。但MI/R+R組的心肌梗死面積（inf/AAR3100%）明顯低于MI/R組（P<0.05）。
　　4．在小鼠MI

11、/R后1 h、3 h、8 h、24 h，相較MI/R組而言，MI/R+R組、MI/R+SL組和MI/R+ML組的血漿hs-CRP和TNF-α水平均顯著降低（P均<0.05）。而MI/R后1 h、3 h、8 h，MI/R+SL組和MI/R+ML組的hs-CRP和TNF-α水平均顯著低于MI/R+R組（P均<0.05）。MI/R后24 h，MI/R+R組、MI/R+SL組和MI/R+ML組之間hs-CRP和TNF-α水平已無統(tǒng)計學差異。MI

12、/R后3d，僅MI/R組和MI/R+R組仍高于Sham組（P均<0.05），MI/R+SL組和MI/R+ML組已與Sham組已無統(tǒng)計學差異，而MI/R+SL組和MI/R+ML組的hs-CRP和TNF-α水平仍明顯低于MI/R組（P均<0.05）。MI/R后7d，各組小鼠的hs-CRP和TNF-α水平均未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學差異。
　　5．在整體動態(tài)檢測過程中（1 h、3 h、8 h、24 h及3d、7d），MI/R+SL組和MI/R+ML

13、組之間的血漿hs-CRP和TNF-α含量始終無統(tǒng)計學差異。
　　結論：
　　1．瑞舒伐他汀預處理可顯著降低小鼠MI/R損傷炎癥因子hs-CRP和TNF-α的水平，發(fā)揮抗炎特性，抑制MI/R損傷中的炎癥反應。在經歷相同程度的心肌缺血狀態(tài)下，瑞舒伐他汀預處理的小鼠心肌梗死面積更小，心肌細胞凋亡受到明顯抑制。他汀類藥物減輕MI/R損傷的機制可能涉及其抗炎功效和抗凋亡作用，而MI/R損傷中的炎癥反應與心肌細胞凋亡緊密相關。他汀類藥物

14、很可能通過抑制MI/R后的炎癥因子和炎癥反應，進而減輕心肌細胞凋亡的發(fā)生。
　　2．他汀類藥物預處理的干預方式均可有效降低小鼠 MI/R損傷過程中的炎癥因子和炎癥反應。在MI/R損傷動態(tài)監(jiān)測過程中，相較常規(guī)給藥劑量而言，他汀類藥物的負荷劑量給藥方式可更為顯著的降低MI/R損傷早期炎癥因子hs-CRP和TNF-α的水平，抑制MI/R損傷炎癥因子和炎癥反應。而他汀類藥物的負荷劑量給藥方式也可以更早減輕MI/R損傷的炎癥反應。在小鼠MI