嗜酸氧化亞鐵硫桿菌中HiPIP和IscA蛋白的表達純化、定點突變及鐵硫簇體外組裝機理的初步研究.pdf

1、嗜酸氧化亞鐵氧化硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中的HiPIP是高氧化還原電位鐵硫蛋白組的成員之一，具有電子傳遞功能，它是嗜酸氧化亞鐵硫桿菌鐵氧化電子傳遞鏈的組分之一。但是至今HiPIP的電子轉(zhuǎn)導(dǎo)機理尚未明確。本論文從A.ferrooxidans中克隆出HiPIP的基因后表達，并用一步親和層析法純化出蛋白。我們通過定點突變構(gòu)建了HiPIP的突變質(zhì)粒C25A，C28A，C37A，C50A。通過紫外-可

2、見掃描及電子順磁共振結(jié)果證實了C25A，C28A，C37A，C50A對于HiPIP結(jié)合[Fe4S4]的重要性。 由iscSUA操縱子編碼的三個蛋白IscS(半胱氨酸脫硫酶)，IscU(支架蛋白)和IscA(鐵離子伴侶)參與了A.ferrooxidans鐵硫簇結(jié)構(gòu)的組裝，但是機理至今仍不清楚。從A.ferrooxidansqp克隆IscA的基因，表達，并通過一步親和層析法純化出蛋白。通過定點突變構(gòu)建了蛋白的突變體D97A，E103

3、A。分子模擬及紫外、電子順磁共振結(jié)果證明了D97位點參與了鐵硫簇的結(jié)合，而E103對IscA與鐵硫簇的結(jié)合卻無明顯的影響。A.ferrooxidans中的IscA可能作為一個平臺完善鐵硫簇結(jié)構(gòu)得前組裝并把它傳遞給目標蛋白，這對于A.ferrooxidans中其他鐵硫蛋白如HiPIP的成熟是必需的。 嗜酸氧化亞鐵氧化硫桿菌中HiPIP有參與鐵和硫呼吸電子傳遞鏈，它具有[4Fe-4S]簇。我們在本論文中證實了HiPIP能夠在體外利用