外源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3(NT-3)通過MAPK信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 NT-3促進(jìn)人神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳作用時(shí)間與濃度
　　目的：選擇NT-3促進(jìn)人神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳作用時(shí)間與濃度。
　　方法：用MTT法檢測(cè)了10,20,40和80nM的 NT-3作用于人神經(jīng)元細(xì)胞后于第2，4，6和8天計(jì)算生長(zhǎng)率。
　　結(jié)果：神經(jīng)細(xì)胞在第四天的生長(zhǎng)情況顯著高于其它組（P<0.05）,而在第四天的20nM的 NT-3作用細(xì)胞后的生長(zhǎng)率顯著高于其它三個(gè)濃度（P<0.05）。
　　結(jié)論：第四

2、天的20nM濃度的 NT-3作用下的人神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)率顯著高，促進(jìn)增殖效果最好。
　　第二部分外源性NT-3通過ERK信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞增殖
　　目的：通過上實(shí)驗(yàn)得到的NT-3對(duì)人神經(jīng)元細(xì)胞作用的最佳的濃度和時(shí)間來進(jìn)一步作用于該細(xì)胞，研究其對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞促生長(zhǎng)作用具體通過MAPK信號(hào)通路中的哪個(gè)途徑實(shí)現(xiàn)的。
　　方法：20nM的NT-3作用于人神經(jīng)元細(xì)胞并于0,2,4,8和12h收集細(xì)胞，用Western blot實(shí)

3、驗(yàn)分別檢測(cè)了MAPK通路的關(guān)鍵蛋白ERK1/2,JNK,P38及磷酸化的ERK1/2,JNK,P38的表達(dá)情況。然后用RNA干擾的方法將此關(guān)鍵蛋白沉默，用20nM的NT-3作用于人神經(jīng)元細(xì)胞并于第2，4，6和8天檢測(cè)其生長(zhǎng)率。
　　結(jié)果：磷酸化的ERK1/2的表達(dá)量在NT-3作用后隨著作用時(shí)間的增加而增加（P<0.05），且在6小時(shí)達(dá)到最高而后保持不變（P<0.05）。然后將ERK1/2干擾，在干擾組中，ERK1/2的下游蛋白p-

4、p90rsk的表達(dá)很少且不隨時(shí)間的變化而變化，當(dāng)ERK被干擾后，細(xì)胞的生長(zhǎng)情況沒有受到影響。
　　結(jié)論：NT-3是通過ERK通路對(duì)人神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖發(fā)揮作用的。
　　第三部分外源性NT-3與其受體結(jié)合后通過ERK通路促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞增殖
　　目的：探討外源性NT-3通過與其受體結(jié)合后通過ERK通路促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞增殖
　　方法：通過RNA干擾的方法將NT-3的受體TrkC沉默，用MTT法檢測(cè)了10,20,40和8

5、0nM的 NT-3作用于人神經(jīng)元細(xì)胞后于第2，4，6和8天計(jì)算生長(zhǎng)率，用Western blot實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)了MAPK通路的關(guān)鍵蛋白ERK1/2,JNK,P38及磷酸化的ERK1/2,JNK,P38的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：TrkC干擾后，細(xì)胞在這八天的生長(zhǎng)中無顯著變化（P>0.05）,而這四個(gè)濃度的 NT-3作用下的神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)率也無顯著變化（P>0.05）。磷酸化的JNK和P38在NT-3作用后0,2,4,8和12h無顯著變化