Trichoderma reesei纖維素內(nèi)切酶的性質(zhì)研究.pdf

1、纖維素(cellulose)占全球植物總干重的30％-50％，是地球上分布最廣、含量最豐富的碳水化合物，但其中89％尚未被利用或未被合理利用，造成資源的極大浪費(fèi)。因此，對(duì)纖維素酶的研究具有重大意義。 絲狀真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)具有降解纖維素和半纖維素的完全酶系，共八種不同的纖維素酶，分別屬于七種不同的族群(CBHⅠ，CBHⅡ，EGⅠ，EGⅡ，EGⅢ，酶B，BGⅠ，BGLⅡ)。通過凝膠電泳的方法，分離

2、得到一種分子量大約為70KD的蛋白質(zhì)。通過對(duì)其性質(zhì)的研究，確認(rèn)其為纖維素內(nèi)切酶。這種纖維素內(nèi)切酶的最適pH為5.6，最適溫度為45℃，Km＝9.55mg/ml，Vmax=2.625ug/min。 在測(cè)此酶的動(dòng)力學(xué)常數(shù)時(shí)，以CMC-Na為底物發(fā)現(xiàn)其中的還原糖量在上升到一定量后出現(xiàn)了一個(gè)下降趨勢(shì)。后分別以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal為底物，發(fā)現(xiàn)也存在此現(xiàn)象。 當(dāng)?shù)孜餅镃MC-Na時(shí)，測(cè)定體系中還原糖量在12

3、5分鐘內(nèi)的變化，發(fā)現(xiàn)其中的還原糖含量成周期性振蕩，周期大約25.00±2.37分鐘。再以葡萄糖為底物，測(cè)定體系中還原糖量在180分鐘內(nèi)的變化，發(fā)現(xiàn)其中的還原糖含量也成周期性振蕩，周期大約為45±2.78分鐘。出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因是這種纖維素內(nèi)切酶有糖苷合成活性。 為進(jìn)一步驗(yàn)證這種纖維素內(nèi)切酶的糖苷合成活性，以葡萄糖為底物，將15分鐘時(shí)出現(xiàn)第一個(gè)反應(yīng)低點(diǎn)的反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行乙?；?，進(jìn)行GC/MS檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)體系中確實(shí)合成了多糖。由此確定了