Trichoderma reesei纖維素內切酶的性質研究.pdf

1、纖維素(cellulose)占全球植物總干重的30％-50％，是地球上分布最廣、含量最豐富的碳水化合物，但其中89％尚未被利用或未被合理利用，造成資源的極大浪費。因此，對纖維素酶的研究具有重大意義。 絲狀真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)具有降解纖維素和半纖維素的完全酶系，共八種不同的纖維素酶，分別屬于七種不同的族群(CBHⅠ，CBHⅡ，EGⅠ，EGⅡ，EGⅢ，酶B，BGⅠ，BGLⅡ)。通過凝膠電泳的方法，分離

2、得到一種分子量大約為70KD的蛋白質。通過對其性質的研究，確認其為纖維素內切酶。這種纖維素內切酶的最適pH為5.6，最適溫度為45℃，Km＝9.55mg/ml，Vmax=2.625ug/min。 在測此酶的動力學常數時，以CMC-Na為底物發(fā)現其中的還原糖量在上升到一定量后出現了一個下降趨勢。后分別以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal為底物，發(fā)現也存在此現象。 當底物為CMC-Na時，測定體系中還原糖量在12

3、5分鐘內的變化，發(fā)現其中的還原糖含量成周期性振蕩，周期大約25.00±2.37分鐘。再以葡萄糖為底物，測定體系中還原糖量在180分鐘內的變化，發(fā)現其中的還原糖含量也成周期性振蕩，周期大約為45±2.78分鐘。出現此現象的原因是這種纖維素內切酶有糖苷合成活性。 為進一步驗證這種纖維素內切酶的糖苷合成活性，以葡萄糖為底物，將15分鐘時出現第一個反應低點的反應產物進行乙?；?，進行GC/MS檢測，結果證實體系中確實合成了多糖。由此確定了