棕色固氮菌突變株DJ194和UW3中固氮酶蛋白的研究.pdf

1、用0.26 mol/L NaCl從吸附有粗提物的DEAE柱洗脫的組分經(jīng)Q-Sepharose柱用0.15-0.40mol/L NaCl緩沖液線(xiàn)形梯度洗脫，再經(jīng)Sephacryl S-200柱、Q-Sepharose柱進(jìn)一步純化濃縮，所得蛋白組分命名為△nifZAV2<,Q2>。它在SDS凝膠電泳膠上的主要蛋白帶的相對(duì)遷移率比部分純的OP Av2中分子量為32kDa的條帶略大些，在天然電泳中比OP Av2具有更高的遷移率。通過(guò)鑒定該制備物

2、為一種具有與OP Av2相似亞基組成的固氮酶Fe蛋白。它與OPAvl重組的乙炔還原活性(6052 nmol C<,2>H<,4>min<'-1>·mg蛋白<'-1>)遠(yuǎn)高于與OP Av2重組的活性。該鐵蛋白與OP Avl重組的乙炔還原活性，H<'+>和N<,2>(以在氬氣和氮?dú)庀路艢涞牟钪当硎?還原活性，均約為與OP Av2重組的活性的2.2倍。這些表明，該鐵蛋白也許具有一般固氮酶Av2所不具的結(jié)構(gòu)和功能特性，使它表現(xiàn)出高還原活性、與先

3、前純化得到的△nifZAV2不同的電泳遷移率和低的鹽洗脫濃度。 經(jīng)DEAE-52，Q-Sepharose和Sephacry S-200柱厭氧層析，從棕色固氮菌突變株UW3純化得到CrFe蛋白制備物。其中～50％的蛋白具有與從野生型固氮菌OP的MoFe蛋白(OP Avl)相似的亞基組成，并可與OP Avl的抗體發(fā)生免疫交叉反應(yīng)。該制備物還具有～40％的OP Avl C<,2>H<,2>，H+和N<,2>(以在氬氣和氮?dú)庀路艢涞牟钪?/p>