小麥內(nèi)生固氮菌的篩選與鑒定.pdf

1、小麥是我國主要的經(jīng)濟農(nóng)作物，小麥的生物固氮及其應(yīng)用的研究對小麥生產(chǎn)中節(jié)約氮肥、減少環(huán)境污染有極其重要的意義。本實驗從小麥的根、莖和葉中分離到內(nèi)生固氮菌128個，其中根中分離到的固氮菌最多，莖次之，葉最少。通過連續(xù)傳代，篩選出31株長勢良好的菌株，通過搖瓶培養(yǎng)后采用測定OD600值來測定其生長量，采用凱氏定氮法測定其固氮量，以此來衡量其固氮能力，結(jié)果顯示A4，H17，C1，D7的生長量(OD600)和固氮量相對較高，固氮量分別達到了3.6

2、mg/L，3.0mg/L，2.8mg/L，2.7mg/L。經(jīng)過兩兩組合試驗，測其組合固氮效果，結(jié)果顯A4+H17組合固氮量比單一菌株高，其他的組合菌與單一菌株的固氮效果相近。綜合評價篩選出高效菌株A4，H17。
　　 通過生理生化試驗顯示:A4，H17為革蘭氏陽性，好氧，明膠水解、淀粉酶、甲基紅試驗，VP試驗、過氧化酶、尿酶、利用檸檬酸鹽陽性，能利用葡萄糖，乳糖，不產(chǎn)氣。利用16SrDNA基因克隆鑒定表明，篩選的菌株為芽孢桿菌(

3、Bacillusaryabhattaistrain)。
　　 對A4，H17的培養(yǎng)條件進行初探，結(jié)果顯示A4，H17最佳培養(yǎng)時間為36h，能在較大范圍的溫度，pH值，鹽濃度下生長，最適溫度為30℃，最適初始pH為7。葡萄糖濃度在10％-15％左右時，有利于菌株生長，菌株較適宜生長的硝酸鉀和氯化銨濃度為4g/L-6g/L。通過測定接種A4，H17，A4+H17對小麥種子萌發(fā)率，幼苗苗高和根長度的影響，發(fā)現(xiàn)接種固氮菌后小麥的萌發(fā)率比