蘇云金芽胞桿菌遺傳穩(wěn)定工程菌的構(gòu)建.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文蘇云金芽胞桿菌遺傳穩(wěn)定工程菌的構(gòu)建姓名：樂超銀申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：喻子牛;孫明200311013 ．c r y 3 A 啟動子對c r y l A c 基因表達的影晌將含c r y 3 A a 啟動子的c r y l A c 基因與含自身啟動子的f r y l A c 基因整臺到無質(zhì)粒、無晶體突變株B M B l 7 1 的染色體上，分別得到整合重組子B M B l 7 1 一B K M 和

2、B M B l 7 1 - 3 1 N ，S D S - P A O E 分析及透射電鏡觀察各菌株伴胞晶體的結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)化子和整合重組子中c r y 3 A a 啟動子都能提高c r y l A c 基因的表達量。4 ．殺蟲晶體蛋白C r y l C 的晶體培養(yǎng)及初步衍射研究將C r y l C 的晶體蛋白( 1 3 3 K D a ) 在堿性條件下溶解，酸性條件下沉淀進行初步提純。再用胰蛋白酶水解，得到活化后的6 4 K D a 毒

3、素蛋白，通過凝膠柱和陰離子交換柱層析進一步純化，并將純化后的6 4 K D a 蛋白進行結(jié)晶。在3 0 ％M P D ，O ．2 M K C l ，l M 檸檬酸鈉，0 ．1 m M P M S F ，p H8 ．0 ，．4 ℃的條件下，經(jīng)過7 ．1 0 天的培養(yǎng)，得到大小為o ．2 m m X 0 ．2 m m x O ．4 m m 的晶體，以同步輻射作為x ．射線源測得晶體分辨率為7 ．O A 。關(guān)鍵詞： 蘇云金芽胞桿菌 整合載體