蘇云金芽胞桿菌對(duì)云斑天牛的抗性研究.pdf

1、研究表明蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)對(duì)鞘翅目害蟲有較好的防治效果。為獲得對(duì)鞘翅目天?？坪οx云斑天牛(Batocera horsfields(Hope))具有高毒力的Bt菌株,我們用本室所保存的504株蘇云金芽胞桿菌對(duì)云斑天牛成蟲進(jìn)行了生物測(cè)定和抗蟲機(jī)理方面的研究,結(jié)果如下:
　　 (1)高毒力菌株的篩選:通過一次初篩和兩次復(fù)篩生物測(cè)定,篩選到一株對(duì)云斑天牛成蟲有較高毒力的菌株ZQ-89。感

2、染喂養(yǎng)20天后校正死亡率達(dá)到55.33％,校正體重減少率為2.22％,產(chǎn)卵減少率為19.62％。ZQ-89不僅對(duì)天牛有較高的抗性,而且對(duì)天牛的生長(zhǎng)量和繁殖力都有較高的抑制作用。
　　 (2)ZQ-89抗蟲機(jī)理的初步研究:從感染ZQ-89菌株死亡的天牛腸道中分離到蘇云金芽胞桿菌FZQ-89,對(duì)其菌體、芽胞及晶體蛋白的形態(tài)進(jìn)行觀察,生測(cè)驗(yàn)證和16SrDNA鑒定后發(fā)現(xiàn),FZQ-89與ZQ-89菌株具有極高的相似性,因此判斷FZQ-89

3、系ZQ-89感染天牛后在體內(nèi)繁殖的子代菌株,由此推測(cè)蘇云金芽胞桿菌可通過天牛取食進(jìn)入其腸道而發(fā)揮抗蟲作用。
　　 (3)ZQ-89殺蟲活性成分的研究:發(fā)現(xiàn)在同等濃度下,純晶體蛋白的殺蟲活性最高。推測(cè)晶體蛋白在ZQ-89對(duì)云斑天牛成蟲的抗性作用中起到了主要作用。檢測(cè)晶體蛋白對(duì)天牛的抗性,計(jì)算出ZQ-89對(duì)天牛的致死中濃度LC50為21.961 mg/mL。
　　 (4)ZQ-89菌株抗蟲基因的克隆和序列分析:對(duì)ZQ-89所

4、產(chǎn)晶體蛋白進(jìn)行肽指紋圖譜分析,發(fā)現(xiàn)其與蘇云金芽胞桿菌Cry1Ac類蛋白有較高的同源性。根據(jù)同源性蛋白設(shè)計(jì)引物,克隆到全長(zhǎng)為3534 bp的抗性基因,命名為cry1Ac-89基因,編碼1177個(gè)氨基酸。
　　 (5)ZAC-89工程菌的構(gòu)建:將cry1Ac-89基因克隆到載體pHT304中,將其轉(zhuǎn)入無晶體突變株BMB171中,對(duì)其所產(chǎn)晶體形狀進(jìn)行了觀測(cè),發(fā)現(xiàn)與ZQ-89相似,都是菱形；SDS-PAGE檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),ZAC-89所產(chǎn)晶