姜黃揮發(fā)油對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞生物學(xué)影響及其對化療增敏作用研究.pdf

1、研究背景:
　　神經(jīng)母細(xì)胞瘤（Neuroblastoma，NB）是兒童顱外最常見的實(shí)體瘤[1]，其發(fā)病率在兒童惡性腫瘤中居第4位[2]。起源于胚胎期神經(jīng)嵴細(xì)胞，由未分化的交感神經(jīng)細(xì)胞組成，因其具有惡性程度高、發(fā)生轉(zhuǎn)移早、死亡率高且預(yù)后差而被稱為兒童癌癥之王[3]。臨床上主要依靠外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)藥物等綜合治療方法。為提高治療效果和預(yù)防復(fù)發(fā)及保證患兒生活質(zhì)量，在治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤中，化學(xué)藥物因可作用于腫瘤的始終而成為不可或缺的手

2、段，但臨床實(shí)踐證明，化學(xué)藥物普遍存在不同程度的毒副作用及耐藥特性[4,5]。因此，國內(nèi)外學(xué)者逐漸將研究方向轉(zhuǎn)向?qū)B的生物學(xué)、遺傳學(xué)特性及發(fā)病機(jī)制的研究，對尋找新的腫瘤治療方法、提高患兒的治愈率和改善患兒的遠(yuǎn)期預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。所以本實(shí)驗(yàn)選用神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞株來研究姜黃揮發(fā)油（turmeric volatile oil， TVO）的抗腫瘤作用,并研究其聯(lián)合順鉑(Cisplatin，DDP)的抗NB作用。本文分兩部分進(jìn)

3、行闡述：第一部分闡述姜黃揮發(fā)油對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞增殖及侵襲力的影響；第二部分探討姜黃揮發(fā)油聯(lián)合小劑量順鉑對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的抑制作用。
　　第一部分:姜黃揮發(fā)油對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞增殖及侵襲力的影響
　　目的
　　探討姜黃揮發(fā)油（TVO）對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞株增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響。
　　方法:
　　分別用不同濃度的TVO（1.25～160 mg

4、/L）行體外干預(yù)SH-SY5Y細(xì)胞，應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞存活率；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測160 mg/LTVO對SH-SY5Y細(xì)胞遷移能力的影響；應(yīng)用Transwell細(xì)胞侵襲試驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力；用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　隨著TVO濃度的升高及干預(yù)時(shí)間的延長，SH-SY5Y細(xì)胞存活率逐漸減低（P<0.01），凋亡率逐漸增加；經(jīng)160mg/L TVO的培養(yǎng)液培養(yǎng)0、12、24h后， SH-SY5Y細(xì)胞遷移度明顯

5、低于對照組（P<0.01）；隨TVO濃度增高，SH-SY5Y細(xì)胞侵襲能力逐漸減弱（P<0.01），且藥物濃度達(dá)到160 mg/L時(shí)，侵襲力與順鉑無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　TVO能有效的抑制SH-SY5Y細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的作用。
　　第二部分:TVO聯(lián)合小劑量DDP對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞抑制作用的研究
　　目的
　　研究TVO聯(lián)合小劑量DDP對體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的增殖、

6、凋亡的影響，并初步探討TVO聯(lián)合DDP作用于SH-SY5Y細(xì)胞的化療增敏作用的分子機(jī)制。
　　方法:
　　分別用TVO、DDP、TVO聯(lián)合DDP處理SH-SY5Y細(xì)胞，應(yīng)用MTT法檢測處理后細(xì)胞生長抑制作用,并計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)；根據(jù)MTT檢測結(jié)果設(shè)空白對照組、TVO組、DDP組和TVO聯(lián)合DDP組，在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞生長狀態(tài)；用Caspase-3檢測試劑盒檢測SH-SY5Y細(xì)胞 Caspase-3酶的表達(dá)

7、情況；用流式細(xì)胞儀檢測SH-SY5Y細(xì)胞總凋亡率。
　　結(jié)果:
　　單獨(dú)TVO及DDP組隨著各自濃度的升高SH-SY5Y細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高（P<0.01），其各自 IC50分別為23.231mg/L及2.617mg/ml；不同濃度 TVO聯(lián)合小劑量DDP（0.625、1.25、2.5、5mg/ml）作用于SH-SY5Y細(xì)胞48h后的增殖抑制率出現(xiàn)逐漸升高的趨勢，且與單獨(dú)DDP組及對照組比較差異具有顯著性(P<0.01)；

8、不同濃度TVO聯(lián)合0.625mg/ml DDP及2.5mg/LTVO聯(lián)合2.5mg/ml DDP表現(xiàn)出藥物的相加作用，其余聯(lián)合組均表現(xiàn)出藥物的協(xié)同作用。倒置顯微鏡下見DDP組和TVO聯(lián)合DDP組SH-SY5Y細(xì)胞脫落死亡明顯，尤以聯(lián)合組更明顯，比空白對照組及 TVO組細(xì)胞生長緩慢，且數(shù)量稀少。TVO聯(lián)合 DDP（0.625、1.25、2.5mg/ml）組和單獨(dú)TVO組的Caspase-3酶活性隨著藥物濃度增加酶活性隨之增強(qiáng)(P<0.01

9、)；單獨(dú)DDP組與對照組Caspase-3酶活性水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)；聯(lián)合組與單獨(dú) DDP組 Caspase-3酶活性水平相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。流式細(xì)胞儀檢測示聯(lián)合組、DDP組、TVO組與對照組相比差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P<0.01)；不同濃度TVO聯(lián)合同一濃度DDP和單獨(dú)該濃度的DDP組相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且隨著TVO濃度的升高細(xì)胞總凋亡率逐漸升高。
　　結(jié)論: