癲癇患兒血清中HMGB1、IL-2、IL-6水平的變化及其意義.pdf

1、背景與目的：
　　癲癇是大腦神經(jīng)元異常同步放電引起的反復性、發(fā)作性、暫時性的慢性腦功能障礙性疾病，是嚴重危害人類健康的神經(jīng)系統(tǒng)常見慢性疾病之一。70％的癲癇病人經(jīng)過正規(guī)抗癲癇治療后可以完全控制甚至治愈，但是仍有30%病人經(jīng)過正規(guī)藥物治療后仍反復發(fā)作而成為難治性癲癇。癲癇的反復發(fā)作可以導致腦損傷，造成患兒神經(jīng)精神發(fā)育遲滯甚至倒退，給患者、家庭和社會帶來了沉重的負擔。因此，研究癲癇的發(fā)病機制，發(fā)現(xiàn)癲癇發(fā)作的關鍵環(huán)節(jié)，開發(fā)針對性的藥物，

2、是尋求癲癇新治療方法的途徑。目前從難治性癲癇病人的腦組織病理學，癲癇動物模型的腦組織中以及癲癇病人的腦脊液、血液中均發(fā)現(xiàn)癲癇發(fā)作與免疫、炎癥密切相關，癲癇發(fā)作可以導致炎性因子釋放，炎性因子又可以降低癲癇發(fā)作的閾值，因此深入研究炎癥因子在癲癇發(fā)生、發(fā)展中的作用，為尋找癲癇治療新的靶點有重要意義。
　　高遷移率族蛋白1（high-mobility-group-box protein1,HMGB1）是存在于真核生物細胞內(nèi)的一類非組蛋白染

3、色體結合蛋白，廣泛存在于淋巴組織、腦、肝、心、脾、腎等組織細胞中，主要存在于胞核。研究顯示巨噬細胞、單核細胞、垂體細胞等受內(nèi)毒素脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）等誘導后，HMGB1可分泌到細胞外?？杉せ罴毎砻娴腡oll樣受體4（Toll-like receptor4,TLR4），通過髓樣分化因子88(myeloid differenti

4、ation factor88,MyD88)依賴信號通道一系列反應最終導致κ基因核結合因子(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB)進入細胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，激活白介素1(Interleukin1，IL-1）、白介素6（Interleukin6，IL-6）、白介素12（Interleukin12，IL-12)、TNF-α、及干擾素-γ（Interferon-γ，INF-γ）等細胞因子的基因表達引起炎癥反應

5、。研究證實HMGB1參與了腦缺血、腦損傷、顱內(nèi)感染、敗血癥、胰腺炎、呼吸系統(tǒng)感染等疾病病理過程，給予 HMGB1抗體可以減輕這些疾病引起的炎癥反應，而相反給予重組HMGB1可以加重炎癥反應。
　　IL-2是由活化的CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細胞因子，是所有T細胞亞群的生長因子，可促進活化B細胞增殖，故為調(diào)控免疫應答的重要因子。IL-6也是一種具有多種生物活性的細胞因子，可以誘導 B細胞、單核細胞分化、誘

6、導IL-2和IL-2受體表達等，在免疫反應中也起至關重要的作用。在遺傳性聲源性癲癇小鼠腦室內(nèi)注射重組IL-2，使得聲音導致癲癇發(fā)作的潛伏期縮短，閾值降低，每次放電和行為發(fā)作的時間延長。使用IL-2抗體及其受體的抗體可明顯降低化學致癇劑和聲音所致癲癇發(fā)作，以上說明細胞因子IL-2、IL-6可能參與了癲癇發(fā)生發(fā)展過程。
　　綜上所述，HMGB1、IL-2、IL-6作為重要的免疫、炎癥因子，在癲癇的發(fā)病過程有重要作用，但是在兒童癲癇中研

7、究不多，為此本研究對癲癇兒童近期發(fā)作后血清HMGB1、IL-2、IL-6濃度進行檢測，探討與其臨床發(fā)作的關系。
　　方法：
　　研究對象為我院兒科病房2013.11月-2014年8月收住院的6月~12歲癲癇兒童85例。依據(jù)2010年國際抗癲癇聯(lián)盟（ILAE）及國際癲癇局（IBE）制定的癲癇發(fā)作和癲癇綜合征診斷指南進行分類，結合臨床表現(xiàn)、既往史及個人史、家族史、腦電圖及腦MRI而確診為原發(fā)性癲癇；排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、顱腦創(chuàng)傷

8、、腦梗塞、腦出血、腦部占位或遺傳代謝性疾病引起的繼發(fā)性癲癇，并排除服用激素、免疫抑制劑及近期感染者。據(jù)癲癇發(fā)作的頻率及每次持續(xù)時間進行分組，本研究將癲癇發(fā)作每天>3次定義為癲癇頻發(fā)組；發(fā)作持續(xù)30分鐘以上或短期內(nèi)連續(xù)間斷發(fā)作超過30分鐘，但是間歇期沒有恢復到發(fā)作前狀態(tài)者定為癲癇持續(xù)狀態(tài)組。據(jù)此85例癲癇兒童分為癲癇1組（頻發(fā)）20例；癲癇2組（持續(xù)狀態(tài)）16例；癲癇3組（非頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)）49例，男女比例分別為12/8、10/6、29/

9、20。各組病人年齡、性別、病程、發(fā)作類型無明顯差別（P>0.05）。癲癇病人在癲癇發(fā)作后12h內(nèi)采集空腹外周靜脈血2ml，然后室溫下靜置30min，離心20min（離心半徑15cm,3000r/min），留取血清，-80℃冰箱保存。正常對照組標本采集處理同上，批量操作檢測。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）測定血清IL-2、IL-6、HMGB-1水平，操作方法嚴格按說明書進行。用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）

10、；以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線，根據(jù)OD值帶入標準曲線擬合方程式，計算待測樣品濃度，結果以ng/L或ng/ml表示。所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法均應用SPSS17.0軟件處理，觀察不同癲癇組之間、癲癇組與正常對照組之間兒童血清中IL-2、IL-6、HMGB1水平變化及其相關性。
　　結果：
　　IL-2在癲癇組中水平明顯高于正常對照組水平，這種變化同樣見于IL-6、HMGB1中，即癲癇頻發(fā)、癲癇持續(xù)狀態(tài)組、非癲癇頻

11、發(fā)或持續(xù)狀態(tài)組與正常組對比HMGB1、IL-2、IL-6水平有明顯差異。進一步通過LSD法進行多組之間兩兩比較后可見癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)組水平較非癲癇頻發(fā)或癲癇持續(xù)狀態(tài)組IL-2水平高(P<0.05)，且癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)兩組之間 IL-2水平有明顯差異（P<0.05）。癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)組較非癲癇頻發(fā)或癲癇持續(xù)狀態(tài)組中IL-6、HMGB1水平高（P<0.05），但癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)組兩組之間HMGB1、IL-6水

12、平對比無明顯統(tǒng)計學意義（P>0.05）。另外本實驗中不同癲癇發(fā)作類型、有無應用抗癲癇藥物患兒血清中HMGB1、IL-2、IL-6水平無明顯差異（見表1、表2，P>0.05）。
　　血清中IL-6與HMGB1水平有顯著相關性，以HMGB1水平為X軸，IL-6水平為Y軸做散點圖分析，可見兩者呈正相關的線性關系，進一步做Spearman秩相關分析，兩者相關系數(shù)r2=0.577，P=0.000。血清中IL-2、HMGB1水平有顯著相關性，