膠孢炭疽菌殺菌劑抗藥性的機制、檢測技術及治理研究.pdf

1、ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterMechanisms，detectiontechniques，andmanagementoffungicideresistanceinColletotrichumgloeosporioidescomplexisolatesfromstrawberryandgrapeCandidate：LINTingAdviser：ZHANGChua

2、n—qing，ProfessorSpeciality：PlantProtectionDateofSubmission：Dec21，2015ZhejiangA&FUniversityLin’an，Zhejiangprovince，PRChinaDec，2015摘要摘要主要由膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)引起的炭疽病是草莓和葡萄生產中發(fā)病廣、防治難度大的病害之一。目前主要采用苯并咪唑類、甲氧基丙烯酸

3、酯(QoIs)類和甾醇脫甲基抑制劑類(DMIs)殺菌劑進行防治。上述殺菌劑具有高度的選擇?；?，作用位點單一，在連續(xù)高劑量藥劑的選擇壓下，使田間膠孢炭疽菌的抗藥性問題日益嚴重并普遍。本文采用區(qū)分劑量法檢測了浙江省不同地區(qū)68個草莓炭疽病菌株對甲基硫菌靈的抗藥性，并對不同表現(xiàn)型的膠孢炭疽菌(BenS、BenRl和BenR2)進行了生物學性狀和溫度影響試驗研究，對靶標基因∥tubulin進行了分析比較。結果顯示草莓炭疽病菌對甲基硫菌靈的抗藥

4、性頻率高達9853％，且均為高水平抗藥性菌株(BenRl)。不同表現(xiàn)型菌株間在不同溫度下無顯著的敏感性變化，生物學性狀也無顯著性差異。BenRl和BenR2(甲基硫菌靈乙霉威雙重抗藥性)的分子機制研究分別為fltubulin基因198位突變(E198A)和200位突變(F200Y)。采用菌絲生長速率法測定了草莓炭疽病菌對吡唑醚菌酯的敏感性，并分析了旁路氧化與膠孢炭疽菌對Qols類殺菌劑敏感性的關系。結果表明：無SHAM時ECsoQ的平均

5、值為665I_tg／mL；當有50Itg／mL的SHAM存在時，其ECso(QS)的平均值為1058I，tg／mL。旁路氧化的相對貢獻值F平均為096，其中7846％的菌株的雅l。進一步采用實時熒光定量PCR技術，分析了不同敏感性的草莓和葡萄膠孢炭疽菌在吡唑醚菌酯處理下期D魅因表達的時間動態(tài)。結果顯示：吡唑醚菌酯處理能誘導么蟪因的表達，在處理后6～12h內，各菌柵D璉因的表達水平均顯著增強，但表達量的差異與菌株對吡唑醚菌酯的敏感性間無顯

6、著的相關性。同時對cytb基因進行了分析，葡萄炭疽病菌中cytb基因第143位未發(fā)生突變，而在草莓炭疽病菌中除檢測到一株野生型菌株外，其它菌株第143位都發(fā)生了突變。建立了可視化的LAMP快速檢測方法，基于fltubulin基因的膠孢炭疽菌LAMP檢測技術具有良好的特異性，并且能區(qū)分敏感和抗藥性菌株。在離體條件下，對抗藥性治理藥劑進行了篩選，確定了咪鮮胺吡唑醚菌酯(1：3)和咪鮮胺苯醚甲環(huán)唑(1：5)兩種最佳復配方案。關鍵詞：膠孢炭疽菌