膠孢炭疽菌殺菌劑抗藥性的機(jī)制、檢測(cè)技術(shù)及治理研究.pdf

1、ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterMechanisms，detectiontechniques，andmanagementoffungicideresistanceinColletotrichumgloeosporioidescomplexisolatesfromstrawberryandgrapeCandidate：LINTingAdviser：ZHANGChua

2、n—qing，ProfessorSpeciality：PlantProtectionDateofSubmission：Dec21，2015ZhejiangA&FUniversityLin’an，Zhejiangprovince，PRChinaDec，2015摘要摘要主要由膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)引起的炭疽病是草莓和葡萄生產(chǎn)中發(fā)病廣、防治難度大的病害之一。目前主要采用苯并咪唑類、甲氧基丙烯酸

3、酯(QoIs)類和甾醇脫甲基抑制劑類(DMIs)殺菌劑進(jìn)行防治。上述殺菌劑具有高度的選擇?；裕饔梦稽c(diǎn)單一，在連續(xù)高劑量藥劑的選擇壓下，使田間膠孢炭疽菌的抗藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重并普遍。本文采用區(qū)分劑量法檢測(cè)了浙江省不同地區(qū)68個(gè)草莓炭疽病菌株對(duì)甲基硫菌靈的抗藥性，并對(duì)不同表現(xiàn)型的膠孢炭疽菌(BenS、BenRl和BenR2)進(jìn)行了生物學(xué)性狀和溫度影響試驗(yàn)研究，對(duì)靶標(biāo)基因∥tubulin進(jìn)行了分析比較。結(jié)果顯示草莓炭疽病菌對(duì)甲基硫菌靈的抗藥

4、性頻率高達(dá)9853％，且均為高水平抗藥性菌株(BenRl)。不同表現(xiàn)型菌株間在不同溫度下無(wú)顯著的敏感性變化，生物學(xué)性狀也無(wú)顯著性差異。BenRl和BenR2(甲基硫菌靈乙霉威雙重抗藥性)的分子機(jī)制研究分別為fltubulin基因198位突變(E198A)和200位突變(F200Y)。采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了草莓炭疽病菌對(duì)吡唑醚菌酯的敏感性，并分析了旁路氧化與膠孢炭疽菌對(duì)Qols類殺菌劑敏感性的關(guān)系。結(jié)果表明：無(wú)SHAM時(shí)ECsoQ的平均

5、值為665I_tg／mL；當(dāng)有50Itg／mL的SHAM存在時(shí)，其ECso(QS)的平均值為1058I，tg／mL。旁路氧化的相對(duì)貢獻(xiàn)值F平均為096，其中7846％的菌株的雅l。進(jìn)一步采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，分析了不同敏感性的草莓和葡萄膠孢炭疽菌在吡唑醚菌酯處理下期D魅因表達(dá)的時(shí)間動(dòng)態(tài)。結(jié)果顯示：吡唑醚菌酯處理能誘導(dǎo)么蟪因的表達(dá)，在處理后6～12h內(nèi)，各菌柵D璉因的表達(dá)水平均顯著增強(qiáng)，但表達(dá)量的差異與菌株對(duì)吡唑醚菌酯的敏感性間無(wú)顯

6、著的相關(guān)性。同時(shí)對(duì)cytb基因進(jìn)行了分析，葡萄炭疽病菌中cytb基因第143位未發(fā)生突變，而在草莓炭疽病菌中除檢測(cè)到一株野生型菌株外，其它菌株第143位都發(fā)生了突變。建立了可視化的LAMP快速檢測(cè)方法，基于fltubulin基因的膠孢炭疽菌LAMP檢測(cè)技術(shù)具有良好的特異性，并且能區(qū)分敏感和抗藥性菌株。在離體條件下，對(duì)抗藥性治理藥劑進(jìn)行了篩選，確定了咪鮮胺吡唑醚菌酯(1：3)和咪鮮胺苯醚甲環(huán)唑(1：5)兩種最佳復(fù)配方案。關(guān)鍵詞：膠孢炭疽菌