假單胞菌產(chǎn)殼聚糖酶的純化和特性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、采用該實(shí)驗(yàn)室分離得到的產(chǎn)殼聚糖酶的假單胞菌,發(fā)酵培養(yǎng)后,將發(fā)酵液冷凍離心,取上清液通過(guò)30%冰冷丙酮沉淀以及Sephadex G-25層析柱和Sephadex G-100柱層析等方法對(duì)酶進(jìn)行了分離純化,得到兩個(gè)具有殼聚糖酶活性的色譜峰,分別合并具有較高酶活性的柱洗脫液后,經(jīng)PEG20 000濃縮,得到兩種純化的殼聚糖酶,即殼聚糖酶Ⅰ和Ⅱ.殼聚糖酶Ⅰ的純化倍數(shù)為6.84倍.純化后的酶分別經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAG

2、E),均顯示一條電泳帶,分子量分別為31KD(成分Ⅰ)和20.1KD(成分Ⅱ).由于酶Ⅱ的總酶活力很低只占酶Ⅰ的不足10%,所以在以后的特性研究中僅研究酶Ⅰ的特性.對(duì)純化后殼聚糖酶Ⅰ的特性研究表明,該酶在4℃下,貯存7天以?xún)?nèi),表現(xiàn)出極高的穩(wěn)定性,酶活力保持在97%以上.以膠體殼聚糖為作用底物,它的最適pH為4.5,在pH5.0-6.5范圍內(nèi)有較高穩(wěn)定性,最穩(wěn)定的pH為5.0.最適作用溫度為55℃,熱穩(wěn)定性范圍為30℃-40℃,最穩(wěn)定的溫

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